【摘 要】
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该研究中,研究人员在原核和哺乳动物细胞两种表达系统对天然CD59分子77个氨基酸序列的游离多肽片段进行了表达探索.通过PCR技术,选择性扩增适于不同载体的目的片段,构建了pBV
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该研究中,研究人员在原核和哺乳动物细胞两种表达系统对天然CD59分子77个氨基酸序列的游离多肽片段进行了表达探索.通过PCR技术,选择性扩增适于不同载体的目的片段,构建了pBV220-CD59、PinPoint-CD59及pCI-neo-CD59三种重组质粒,分别用于原核表达包涵体形式、融合蛋白形式和真核细胞分泌型CD59分子的表达研究.在PinPoint原核表达系统中,获得了CD59融合蛋白形式的表达.薄层凝胶扫描分析显示,22kDa的目的蛋白表达量占菌体蛋白总量的6.23%.用亲和素树脂对生物素化的融合蛋白进行亲和分析,得到较纯的蛋白样品.在微量反应性溶血抑制实验中,纯化样品显示出溶血抑制活性.说明所得融合蛋白具有一定的CD59功能活性.该研究对体外表达GPI-结构的可溶性游离CD59分子进行了探索,为获得应用型CD59活性分子打下基础.
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