第一部分糖皮质激素和TGFβ1在人卵巢癌HO-8910细胞中协同上调PAI-1表达的机制研究 糖皮质激素(glucocorticoid，GC)和转化生长因子β1(transforming growth factorβ1，TGFβ1)在它们各自的受体介导下，通过激活信号转导通路，调节基因的表达产生生物学效应。近年来已证明两通路间存在复杂的相互作用，根据组织细胞类型的不同和调节基因的不同，表现为相互拮抗和协同效应。本实验室前期的工作发现人工合成的糖皮质激素-地塞米松(dexamethasone，Dex)和TGFβ1单独或联合处理，均能增强卵巢癌细胞系HO-8910与其细胞外基质的粘附能力，且联合作用大于单独作用。纤溶酶原激活物抑制剂(Plasminogen activator inhibitor PAI-1)是纤溶酶原激活物的生理抑制剂；能通过抑制PAs对纤溶酶原的激活而抑制纤维蛋白和细胞外基质降解，从而促进基质的沉积和细胞的粘附。已证明PAI-1是TGFβ1的内源性靶基因，TGFβ1能通过转录水平的作用诱导其表达，糖皮质激素也能上调PAI-1的表达，二者有协同作用，但机制不很清楚。为了进一步阐明Dex和TGFβ1通路间的相互作用和促进细胞粘附的机制，本实验以卵巢癌HO-8910细胞为模型，观察了Dex和TGFβ1单用和合用对PAI-1表达的影响及其可能的机制。 我们的实验首先证实了Dex和TGFβ1单用和联用对HO-8910绌胞的PAI-1都有上渊作用，二者的联合作用大于单用，并以早期(2-4小时)的协同作用最为明显，因此我们主要探讨了Dex和TGF-β1早期协同上调PAI-1的机制。 我们首先柃测了Dex和TGFβ1单独或联合作用后PAI-1 mRNA的降解速率，证明Dex，TGFβ1单用和合用对PAI-1 mRNA的稳定性都没有明显影响，表明Dex和TGFβ1协同作用发生在转录水平。进一步实验表明，糖皮质激素受体(GR)的特异性抑制剂RU486不仅可以完全阻断Dex的作用，也能明显阻断二者的协同作用，阻断后PAI-1 mRNA的水平约相当于TGFβ1单独作用的水平，表明协同作用是通过GR介导的，并提示在TGFβ1作用下，GC/GR的作用被增强。检测了TGFβ1处理4小时对GC/GR报告基因MMTV-luc的活性，发现TGFβ1的确能增强GR的转录活性。接下来我们发现TGFβ1中和抗体对Dex和TGFβ1协同作用的阻断率大于对TGFβ1单用的阻断率，提示Dex也能增强TGFβ1信号通路的传导。最后我们观察了p38MAPK通路阻断对Dex和TGFβ1单独以及合用时上调PAI-1表达的影响，发现该通路阻断不仅能部分阻断TGFβ1的作用，还能明显阻断Dex和TGFβ1协同上调PAI-1 mRNA的作用。 小结：Dex和TGFβ1联用可以在转录水平协同上调HO-8910细胞中PAI-1的表达，该作用通过GR介导。本实验首次发现TGFβ1能增强GR的转录活性，并发现p38MAPK通路不仅参与了TGFβ1的作用，也参与了TGFβ1和Dex协同上调PAI-1的作用。实验还证实Dex也能增加TGFβ1上调PAI-1的作用。 第二部分低氧上调大鼠大脑皮质中stomatin的表达 Stomatin是一种膜上的脂筏蛋白，能与多种膜蛋白，如离子通道、转运子、骨架蛋白和信号转导蛋白等相互作用，并影响其功能。本实验首次研究了低氰条件下大鼠大脑皮质中stomatin的表达情况，以探讨其在缺氧适应中可能起的作用。 我们将大鼠放入8％O2、92％N2混合气的低氧舱内不同时间，用RT-realtime PCR和Western blot方法检测了大鼠大脑皮质中stomatin mRNA和蛋白表达的变化。结果显示，低氧可使大鼠脑stomatin的mRNA和蛋白水平明显增高，其中低氧12小时mRNA表达水平为对照大鼠的2.2倍，蛋白为对照的1.5倍。进一步研究表明，去肾上腺后低氧仍能上调大鼠脑stomatin的表达，表明低氧上调大鼠脑皮质中stomatin表达不依赖于肾上腺皮质激素。实验还发现去肾上腺能降低大鼠脑皮层中stomatin的水平，给去腺大鼠补充人工合成的糖皮质激素Dex，不能使stomatin的表达明显上调；但去腺＋低氧＋Dex组stomatin的表达量明显高于去腺＋低氧组，表明GC单独对大鼠脑皮质中stomatin的表达无明显影响，但是能增强低氧对stomatin的诱导作用。 结论：本研究发现低氧能上调大鼠脑stomatin的表达，该作用不依赖肾上腺皮质激素；GC单独对大鼠脑皮质中stomatin的表达无明显影响，但是能增强低氧对stomatin的诱导作用。GC上调的意义目前还不清楚，有待于进一步研究。