miR-638在U251神经胶质瘤细胞的生物学功能研究

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目的研究微小RNA-638(mi R-638)在恶性胶质瘤组织以及人胶质瘤细胞系中的表达情况,观察mi R-638的表达对U251细胞增殖、迁移以及侵袭的影响。通过生物信息学方法对mi R-638进行靶点预测,探讨mi R-638在U251细胞中通过靶向抑制Notch4分子从而参与胶质瘤细胞的侵袭过程。方法(1)逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测正常神经组织与胶质瘤组织和人正常星形胶质细胞系(NHA)与胶质瘤细胞株(U251、U87、T98G、A172)中mi R-638的表达水平;(2)选用U251细胞(mi R-638表达最显著)分别检测转染mi R-638模拟物和mi R-638抑制物后,Transwell实验检测U251细胞侵袭水平的改变;(3)MTT实验以及细胞划痕实验检测mi R-638的表达对U251细胞的增殖以及迁移作用的影响;(4)生物信息学预测mi R-638对Notch4的靶向调控关系,并在m RNA水平和蛋白水平检验mi R-638对Notch4的靶向抑制作用;(5)构建人Notch4真核表达载体(p CMV-Notch4 c DNA)及空质粒(pc DNA)转染U251细胞株,观察过表达U251细胞中的Notch4表达水平,同时检测转染载体后的U251细胞侵袭水平的改变。结果(1)与正常人脑组织/人星形胶质细胞相比,胶质瘤组织和胶质瘤细胞株中mi R-638的表达上调;(2)过表达mi R-638使U251细胞的侵袭细胞数上升(P<0.01),而抑制mi R-638表达后U251细胞的侵袭细胞数减少(P<0.01),即mi R-638促进U251细胞的侵袭能力(3)mi R-638的表达能促进U251细胞的迁移能力,但是不影响细胞增殖能力(P>0.05);(4)Notch 4在胶质瘤细胞(U251)中表达下调,并与mi R-638的表达呈负相关性;(5)mi R-638在U251细胞中能直接靶向抑制Notch 4的表达,真核表达载体(p CMV-Notch4 c DNA)提高Notch 4在U251细胞中的表达能使侵袭细胞数减少(P<0.01)。结论(1)mi R-638在胶质瘤中高表达,对胶质瘤细胞的侵袭和迁移作用有促进作用。(2)mi R-638可能通过靶向抑制Notch 4的表达促进胶质瘤细胞的侵袭能力。
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