目的本文采用升高兔眼内压法建立一种能模拟人视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury RIRI)特征的动物模型,观察给药后兔视网膜形态的改变,凋亡基因Bcl-2、Bax蛋白表达的情况以及神经细胞凋亡的变化,探讨红花注射液对RIRI的保护作用及对细胞凋亡和凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响,为临床治疗视网膜缺血性疾病提供理论依据。方法选择日本健康纯种大耳白兔重(2.4±0.2)kg,共78只,雄性,并随机分为3组:正常组(6只)、损伤组(36只)、治疗组(36只),又将损伤组和治疗组按再灌注的时间不同分为损伤后6h、12h、24h、48h、72h、5d组(每组各6只实验大耳白兔)。均选右眼为实验眼。正常组不造模,损伤组和治疗组通过前房灌注升高眼内压法复制视网膜缺血再灌注损伤模型;治疗组在造模成功后立即经耳缘静脉注射红花注射液(2.0ml/kg),1次/d。正常组和损伤组耳缘静脉注射等剂量的生理盐水。各组分别于损伤后6h、12h、24h、48h、72h、5d经耳缘静脉注射空气10ml处死实验大耳白兔并立即摘取实验眼球,固定包埋切片。对各时间段的兔视网膜组织采用HE染色观察其形态学变化,免疫组化法检测凋亡基因Bcl-2、Bax的表达并采用TUNEL法检测视网膜组织神经细胞凋亡情况,将所得实验结果行图像分析,所得数据选用SPSS17.0统计软件进行统计学分析。结果1 HE染色:损伤组神经节细胞数较正常组减少,再灌注6h视网膜轻度水肿,随时间推移水肿逐渐加剧,各层细胞排列疏松,空泡样变,24h视网膜水肿最明显,48h-72h视网膜水肿减轻,神经节细胞数减少,5d时视网膜水肿基本消失,视网膜变薄。治疗组神经节细胞数减少、视网膜水肿程度均较损伤组减轻。2免疫组化检测视网膜细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的变化:正常组中未见Bcl-2、Bax蛋白阳性表达,再灌注6h可见少量阳性表达,主要存在于神经节细胞层;随再灌注时间延长表达逐渐增加,24h阳性表达达到高峰,内核层也可见少量表达,外核层未见表达;48h-72h蛋白阳性细胞数逐渐下降,主要存在于神经节细胞层;至再灌注5d视网膜几乎未见阳性细胞表达。治疗组Bcl-2、Bax蛋白表达变化趋势与损伤组基本相似。相同时间点比较,治疗组视网膜细胞Bcl-2表达明显高于损伤组(除5d组),Bax表达明显低于损伤组(P<0.05)。损伤组内与治疗组内不同时间点之间阳性细胞计数差异显著(P<0.01)。3 TUNEL法对视网膜神经细胞凋亡进行检测发现:正常组未见凋亡阳性细胞,再灌注6h凋亡细胞少量表达,12h表达逐渐增多,24h凋亡细胞阳性表达达至高峰,主要存在于视网膜神经节细胞层与内核层;48h-72h阳性表达逐渐下降,至5d几乎无凋亡阳性细胞。治疗组视网膜凋亡细胞阳性表达的变化趋势同损伤组基本相同,但各时间点表达均明显少于损伤组。损伤组与治疗组两组间同一时间比较,6h、12h、24h、48h组差异具有显著统计学意义(P均<0.01),72h组差异具有统计学意义(P<0.05),5d组差异无明显统计学意义(P>0.05)。损伤组内与治疗组内不同时间点间凋亡阳性细胞计数差异具有统计学意义(P均<0.01)。结论红花注射液对兔RIRI具有明显的保护作用,其作用机制可能是通过下调Bax蛋白及上调Bcl-2蛋白的表达,从而抑制RIRI时神经细胞的凋亡。