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目的:研究Ki-67、p53、mdm2、p21WAF1/CIP1在中耳胆脂瘤上皮细胞中的表达及其相关性,探讨它们在中耳胆脂瘤中的发病机制中的作用。
方法:选取2005年6月至2008年12月在我院住院接受手术治疗的20例胆脂瘤中耳炎患者的存档石蜡包埋组织作为研究组(20耳),所选病例经临床资料和病理检查证实为后天原发性胆脂瘤中耳炎。选取8例鼓室成形患者接近鼓膜的外耳道皮肤作为对照组(8耳)。采用免疫组化SP法检测标本上皮细胞Ki-67、p53、mdm2、p21WAF1/CIP1蛋白的表达。每例观察包含上皮细胞在内的5个不重复、不重叠的400倍视野,以图象采集系统采集图象,用Image Pro Plus6.0图象分析系统计数其中的阳性细胞数及细胞总数,分别计算上皮细胞Ki-67、p53、mdm2、p21WAF/CIP1的标记指数(labeling index,LI),LI=阳性细胞数/计数细胞总数×100%。所有数据经SPSS15.0 for Windows软件进行统计分析,数据以x±s表示,两独立样本进行方差齐性检验,方差齐用t检验,P<0.05有统计学意义,比较两组上皮细胞Ki-67、p53、mdm2、p21WAF1/CIP1蛋白表达的差异;对研究组试验数据进行Pearson相关分析,研究中耳胆脂瘤上皮细胞Ki-67、p53、mdm2、p21WAF1/CIP1蛋白表达间的相关性。
结果:
1、Ki-67蛋白定位于细胞核,细胞浆内未见Ki-67蛋白的表达,细胞核被染成棕黄色者为Ki-67阳性细胞,阳性细胞核表达呈点状散在分布。中耳胆脂瘤上皮细胞Ki-67阳性细胞主要分布在上皮细胞的基底层、棘细胞层,颗粒层和角质层未见表达,上皮下结缔组织中未见Ki-67阳性细胞,胆脂瘤上皮细胞基底层未见异常细胞增殖和浸润。外耳道皮肤上皮细胞Ki-67阳性细胞局限在上皮细胞的基底层,数量较少,分布稀疏。Ki-67在中耳胆脂瘤上皮细胞标记指数(LI)为(19.2±4.5),显著高于外耳道皮肤上皮细胞LI(6.6±2.1),t=2.247,P=0.035,差异有显著性。
2、p53蛋白定位于细胞核,细胞浆内未见p53蛋白的表达,细胞核被染成棕褐色者为p53阳性细胞,阳性细胞核表达呈点状散在分布。中耳胆脂瘤上皮细胞p53阳性细胞主要分布在上皮细胞的基底层、棘细胞层,颗粒层和角质层散在表达。外耳道皮肤上皮细胞p53未见表达或极少量表达,极少量表达的p53阳性细胞散在分布于上皮细胞基底层。p53在中耳胆脂瘤上皮细胞标记指数(LI)为(16.5±4.1),显著高于外耳道皮肤上皮细胞LI(2.1±0.4),t=2.605,P=0.015,差异有显著性。
3、mdm2蛋白定位于细胞浆,细胞核内未见mdm2蛋白的表达,细胞浆被染成棕黄色者为mdm2阳性细胞。中耳胆脂瘤上皮细胞mdm2阳性细胞主要分布在胆脂瘤上皮细胞的棘细胞层、颗粒层和角质层,在基底层细胞表达较弱,染色最强的部位是颗粒层和角质层。外耳道皮肤上皮细胞mdm2未见表达或极少量表达,极少量表达的mdm2阳性细胞散在分布于上皮细胞颗粒层或角质层。mdm2蛋白在中耳胆脂瘤上皮细胞标记指数(LI)为(36.1±7.0),显著高于外耳道皮肤上皮细胞LI(1.7±0.5),t=3.325,P=0.003,差异有显著性。
4、p21WAF1/CIP1蛋白定位于细胞核,细胞核被染成棕黄色者为p21WAF1/CIP1阳性细胞,细胞浆内未看到p21WAF1/CIP1蛋白的表达。中耳胆脂瘤上皮细胞p21WAF1/CIP1阳性细胞分布于上皮的全层,以靠近基底层的棘细胞层和颗粒层显著。外耳道皮肤上皮细胞p21WAF1/CIP1未见表达或极少量表达,极少量表达的p21WAF1/CIP1阳性细胞散在分布于上皮细胞棘细胞层或颗粒层。p21WAF1/CIP1蛋白在中耳胆脂瘤上皮细胞标记指数(LI)为(26.7±7.5),显著高于外耳道皮肤上皮细胞LI(2.0±0.6),t=2.775,P=0.013,差异有显著性。
5、采用Pearson相关统计学分析,发现中耳胆脂瘤上皮细胞p53、mdm2、p21WAF1/CIP1三种蛋白表达存在两两正相关,其余指标未见相关性。
结论:
1、与正常外耳道皮肤上皮细胞比较,中耳胆脂瘤上皮细胞Ki-67表达增强;在胆脂瘤基底层细胞层未见异常增殖和浸润,提示胆脂瘤上皮细胞有显著的增殖特性,但中耳胆脂瘤仍属中耳的良性病变。
2、中耳胆脂瘤上皮细胞p53、mdm2、p21WAF1/CIP1三种蛋白表达较外耳道皮肤上皮细胞增强,提示p53、mdm2、p21WAF1/CIP1蛋白异常表达与中耳胆脂瘤发生密切相关。中耳胆脂瘤上皮细胞p53、mdm2、p21WAF1/CIP1三种蛋白表达存在两两正相关,提示p53-mdm2-p21 WAF1/CIP1通路可能参与致病因素所致的胆脂瘤上皮细胞DNA受损后机体修复调控机制。
3、中耳胆脂瘤上皮细胞中p53、mdm2在上皮细胞表达存在空间分布差异,其意义在于基底细胞层中p53高表达、mdm2低表达可能与维系上皮细胞组织学上良性行为的调控有关;颗粒层、角质层p53蛋白低表达、mdm2高表达可能与胆脂瘤上皮细胞的过度增殖、角质化上皮脱屑堆积形成有关。