【摘 要】
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蒙古黄芪,豆科黄芪属多年生草本植物,是一种重要药用植物,近年来野生资源已濒临灭绝,主要来源于人工栽培。但因其种皮的硬实及休眠期等原因,存在发芽困难、出苗不整齐等问题。本文以内蒙古自治区的道地蒙古黄芪种子为样品,探索负电晕电场对蒙古黄芪种子活力的影响。逐步增加处理次数与时长,分析幼苗的抗氧化酶活和活性氧含量;结合转录学探究了蒙古黄芪对不同负电晕电场处理剂量响应的分子机制,相关结果如下:1.分别用-3
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蒙古黄芪,豆科黄芪属多年生草本植物,是一种重要药用植物,近年来野生资源已濒临灭绝,主要来源于人工栽培。但因其种皮的硬实及休眠期等原因,存在发芽困难、出苗不整齐等问题。本文以内蒙古自治区的道地蒙古黄芪种子为样品,探索负电晕电场对蒙古黄芪种子活力的影响。逐步增加处理次数与时长,分析幼苗的抗氧化酶活和活性氧含量;结合转录学探究了蒙古黄芪对不同负电晕电场处理剂量响应的分子机制,相关结果如下:1.分别用-3 kV—-7 kV处理蒙古黄芪30、60、90 min。测定种子活力相关结果表明,-7 kV处理90 min下,幼苗的丙二醛含量显著低于对照,种子的电导率、表观接触角均显著低于对照,吸水率显著高于对照,表皮经扫描电镜观测未见恶性损伤。表明适宜的负电晕电场处理可有效的减轻脂膜过氧化作用,增强膜系统的修复能力,有利于改善种子活力。2.分别用-7 kV,90 min,处理蒙古黄芪种子1—6次。结果表明,单次处理下,各生理生化指标的变化与对照相差不显著;累积处理6次后,超氧化物歧化酶、过氧化物酶的酶活性较对照分别增强了88%、31%,过氧化氢酶活是对照组3.81倍;其余处理以上各指标有上升趋势,也有下降趋势,由此确定处理1次和6次进行转录组测序。3.转录组鉴定出单次处理差异表达基因数1134个,包括368个上调和766个下调基因;累积处理组22791个,包括15082个上调和7709个下调基因。维恩图和火山图发现,两组有相同差异表达基因694个,累积处理总差异表达基因数约是单次处理的20倍且更具显著性。4.根据差异表达基因功能注释、富集结果发现,单次和累积处理都有大量差异表达基因富集到调控植物生长发育的过程;GO数据库注释发现两组差异基因功能相似,但累积处理的基因数量是单次组几倍或几十倍;KEGG富集发现,单次处理被富集到108条通路,显著富集的有1条(Q<0.05),累积处理差异基因被富集到136条通路,显著富集的有16条。利用实时荧光定量PCR测定了9个基因的表达量,验证了转录组数据的可靠性。总之,适宜剂量的负电晕电场处理蒙古黄芪种子后,种子的活性有显著改善且表皮出现良性裂纹,有益于种子吸水萌发;-7 kV,90 min累积处理6次,幼苗生长发育过程中的生理生化指标显著高于对照组与单次处理组,抗逆性相关的基因表达量得到明显提高,证实适宜的累积处理是比单次处理更好的诱变处理剂量。
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