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缺血性卒中是临床常见疾病,其病因多样,发病机制复杂.越来越多的研究表明,炎症反应在卒中的病理过程中作用重要.脑缺血后强烈的炎症反应在缺血数分钟内即可启动,并一直持续到晚期神经组织修复再生阶段,即脑缺血后的整个病理过程贯穿了神经炎症反应.小胶质细胞作为脑内最主要的炎症反应相关细胞,在炎症反应中处于核心地位.研究发现,激活的小胶质细胞可以分为M1和M2两种功能明显不同的极化亚型:M1型(促炎型)细胞激活后可产生并分泌多种炎症因子、细胞毒性因子等,造成神经组织炎性损伤;M2型(抗炎型)细胞激活后则可通过产生及分泌免疫调节因子、神经营养因子和抑炎因子等,抑制炎症反应参与免疫调节,并能有效促进组织修复以及损伤后神经组织再生.鉴于缺血性卒中后小胶质细胞作用的两面性,调控M1/M2型小胶质细胞动态平衡可能成为减轻缺血性脑损伤和促进卒中后神经功能恢复的有效治疗策略. 干预并调节小胶质细胞功能和分化是目前神经系统炎症领域的研究热点.脂氧素(lipoxins,LXs)是机体在炎症过程中产生的内源性脂质介质,被称为炎症的"终止信号",具有强力抗炎、促进炎症及时消退的作用,其中LXA4是LXs的重要生理活性形式之一.已有诸多研究表明,在急性炎症反应中LXA4具有强大抗炎、促炎症迅速消退的作用.缺血性卒中动物模型的研究发现,LXA4可通过抑制炎症反应进而减轻缺血后脑损伤,但其具体作用机制尚未明确,推测LXA4有可能能通过调节小胶质细胞活化表型变化进而发挥神经保护作用,目前尚无相关研究的报道. 因此,本研究以氧糖剥夺/复氧(Oxygen Glucose Deprivation/Reoxygenation,OGD/R)后活化的小胶质细胞(Microglia,MG)为研究对象,以脂氧素A4(Linpoxin A4,LXA4)为药物干预手段,观察MG分化情况,从细胞水平探讨LXA4对OGD/R后MG分化的影响,并初步探讨相关分子机制.旨在为LXA4用于治疗缺血性卒中提供理论依据. 目的： 采用原代培养小胶质细胞建立体外OGD/R模型,研究预探讨LXA4对OGD/R后MG分化的影响,并初步探讨相关分子机制. 方法： 取小鼠大脑皮层分离并体外培养MG,构建OGD/R模型:OGD时间依照参考文献及预实验结果设定为6h,复氧时间设立2h、6h和18h三个时间点.实验分组(1)Control组:仅用正常培养液培养;(2)LXA4对照组:在培养液中加入LXA4;(3)OGD/R组:将细胞进行OGD/R;(4)OGD/R联合LXA4干预组:LXA4预处理后再进行OGD/R.于OGD/R后相应时间点收集各组上清及原代小胶质细胞: 1.免疫荧光法(Iba1)鉴定原代提取小胶质细胞纯度; 2.Elisa法检测OGD/R后小胶质细胞培养液上清中炎症因子TNF-α、IL-1β的含量; 3.RT-PCR检测OGD/R后不同时间点M1型小胶质细胞生物标志物(iNOS、CD32、TNF-α、IL-1β)和M2型小胶质细胞标志物(Arg-1、CD206)mRNA表达; 4.免疫印迹法Western-blot分别检测M1型小胶质细胞标志物(iNOS)和M2型小胶质细胞标志物(Arg-1)蛋白表达情况; 5.免疫荧光法检测M1型小胶质细胞标志物(iNOS)和M2型小胶质细胞标志物(Arg-1)表达情况. 6.RT-PCR检测Notch信号通路相关分子表达. 结果： ①与Con组相比OGD/R组随着复氧时间的延长,Elias结果示MG炎症因子TNF-α、IL-1β在培养液上清中的表达量呈上升的趋势(P<0.001),LXA4干预后其表达量显著下降(P<0.001);RT-PCR结果示OGD/R组炎症因子TNF-α、IL-1βmRNA表达量显著增高(P<0.001),LXA4干预后其表达量显著下降(P<0.001); ②OGD6h/R2h后,RT-PCR结果显示OGD/R组iNOS、CD32的表达较Control组有显著升高(P<0.01、P<0.001),用LXA4对其进行干预后,与OGD/R组相比,iNOS、CD32的含量有所降低(P<0.001);Arg-1、CD206的表达较Control组有显著升高(P<0.001),用LXA4对其进行干预后,与OGD/R组相比,其含量均有所降低(P<0.01、P<0.001),且OGD6h/R2h组,MG Arg1/iNOS比值增高;在OGD6h/R18h时,OGD/R组各表型标志物表达依然最高,LXA4干预后对其表达的抑制作用较OGD6h/R2h时减弱,但与对照组相比,Con+LXA4组M2型标志物Arg-1、CD206表达升高(P<0.05、P<0.01). ③与Con组相比,OGD/R组Notch1、Hes1及Hes5表达量升高(P<0.001),LXA4干预后Notch1、Hes1表达量下降,Hes5表达量升高. 结论： LXA4能够影响OGD/R后MG的分化,这种作用可能是通过Notch信号通路实现的.