γ-氨基丁酸(aminobutyric adic,GABA)受体是多种杀虫剂的重要作用靶标,而氟虫腈(Fipronil,商品名为锐劲特)是作用于GABA受体的一种苯基吡唑类杀虫剂,故而本文选取家蝇为研究对象,采用荧光标记法与分子模拟法研究氟虫腈与家蝇脑GABA受体的相作用。从实验和理论两方面验证氟虫腈对昆虫的高毒性,对研制高效、绿色的杀虫剂有重要意义。本文研究内容及结果如下:1、成功制备了荧光复合物FITC-氟虫腈,并用XPS进行表征。荧光标记试验结果显示,氟虫腈与家蝇脑内GABA受体有较强的相互作用,其最大结合量[RT]值和亲和常数Kd值分别为21.3±2.5(pmol/mg protein)和109±9(nM),从实验方面证明了氟虫腈对昆虫具有高亲和性,从而导致了它的高毒性。2、使用同源建模的方法,以烟碱型乙酰胆碱受体结构为模板构建了果蝇RDL受体跨膜区的三维结构模型,然后利用得到的模型与氟虫腈小分子进行分子对接,并对RDL受体-氟虫腈配体复合物进行分子动力学模拟。研究结果表明,所建模型合理,氟虫腈与果蝇RDL受体形成的复合物很稳定,从理论方面证明了氟虫腈对昆虫具有高亲和性,从而导致了它的高毒性。3、本实验选用1,4-丁二醇二缩水甘油醚作为活化剂,将其连接在Sepharose CL-6B,并使用氨水氨化然后将氟虫腈衍生物固定在Sepharose CL-6B上。简化了介质合成的步骤,提高了产率,首次成功运用氟虫腈亲和柱分离纯化了家蝇脑GABA受体。4、采用非离子型表面活性剂NP-40溶解家蝇脑内GABA受体,溶出效果较好,溶出蛋白浓度为730ug/L。5、将制备好的氟虫腈亲和介质装柱,分离纯化家蝇脑内的GABA受体,将得到的蛋白进行SDS-PAGE鉴定显示了分子量分别为45 kD、50 kD和80 kD的三条带。