Pokemon在胃癌细胞中对TGF-β1表达的影响及机制初步研究

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目的:观察在Pokemon人胃癌细胞中对TGF-β1表达的影响及机制初步研究,分析其与临床病理特征的相关性。方法:实验分为两部分。第一部分:1)以体外培养的MGC-803胃癌细胞系为研究对象,将Pokemon高表达质粒载体以及空载体质粒瞬时转染MGC-803胃癌细胞系,先通过Q-PCR以及Western Blot检测构建的高表达pokemon质粒,再通过荧光显微镜观察过表达Pokemon对MGC-803胃癌细胞系中TGF-β1表达的影响,以及用Q-PCR检测其表达情况,并通过Western Blot检测Pokemon对部分EMT相关蛋白的表达影响;2)以体外培养的SGC-7901胃癌细胞系为研究对象,将Pokemon高表达质粒载体以及空载体质粒瞬时转染SGC-7901胃癌细胞系,先通过Q-PCR以及Western Blot检测构建的高表达pokemon质粒,再通过荧光显微镜观察过表达Pokemon对SGC-7901胃癌细胞系中TGF-β1表达的影响,以及用Q-PCR检测其表达情况,并通过Western Blot检测Pokemon对部分EMT相关蛋白的表达影响;第二部分:应用双荧光素酶报告基因活性实验测定在MGC-803以及SGC-7901胃癌细胞系中转染表达Pokemon质粒对TGF-β1启动子的影响。结果:1)在MGC-803以及SGC-7901胃癌细胞系转染Pokemon质粒后,通过Q-PCR以及Western Blot检测到pokemon的表达水平增高,2)在MGC-803以及SGC-7901胃癌细胞系中,通过Q-PCR检测到高表达Pokemon抑制TGF-β1的m RNA水平;3)在MGC-803以及SGC-7901胃癌细胞中,通过免疫荧光技术检测到高表达Pokemon抑制TGF-β1表达;4)在MGC-803以及SGC-7901胃癌细胞系中,通过Western Blot检测到高表达pokemon抑制人胃癌细胞中的部分EMT相关分子的表达;5)在MGC-803以及SGC-7901胃癌细胞系中,通过双荧光素酶报告基因活性实验检测到高表达Pokemon通过抑制TGF-β1的启动子从而影响其表达。结论:1)Pokemon抑制MGC-803以及SGC-7901胃癌细胞系中EMT的发生,其通过抑制TGF-β1的表达从而调节EMT过程;2)Pokemon在胃癌细胞中抑制TGF-β1的表达,其机制和Pokemon通过抑制TGF-β1的启动子活性有关。
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