抗营养阻遏高产木素酶白腐菌选育及其产酶特性和对染料的脱色作用

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:fengwei27149
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目前,白腐菌作为一类广谱的生物修复剂受到国内外的高度重视。但由于其对污染物降解起主要作用的木质素降解酶系属于次生代谢产物,其合成由氮等主要营养物质的缺乏所激发,而污染环境却多属于富营养环境,这就限制了白腐菌在环境污染生物修复中的应用。同时,因菌体生长与酶合成不同步使其酶产量也难以得到实质性提高。因此,为了能使白腐菌及其木质素降解酶系在工业及环境治理领域早日得到应用,关键在于能否获得在富营养条件下产生抗营养阻遏,高效合成木质素降解酶系且菌体生长快的突变菌株。本论文以白腐菌模式菌种黄孢原毛平革菌为材料,通过紫外诱变等手段对其进行了抗营养阻遏高产木质素降解酶的白腐菌选育,并对筛选出的抗营养阻遏优良菌株进行了产酶特性研究,确定了其产酶的最佳工艺参数及影响因素,并进一步研究了选育菌株经秸秆、木粉、甘蔗渣三种不同基质固态发酵培养后对四种难降解染料刚果红、酸性品红、萘酚绿B和孔雀石绿的脱色效果。通过研究,得到如下结果:(1)经紫外诱变选育得到一株在富氮条件下能高效合成木质素降解酶系且菌体生长快的突变菌株PCu-9,它打破了原菌株产酶需要氮营养限制的缺陷,实现了菌体生长与木质素降解酶系合成的同步进行。(2)对选育菌株产酶培养基组分进行了优化,PCu-9菌株在以20g/L葡萄糖,2.2g/L酒石酸铵,1g/L吐温80,0.2g/L Mn2+为主要成分并在培养1d后,向其添加诱导剂苯甲醇至5.2mmol/L时产酶活性最佳;其产酶的最佳培养条件为温度37℃,培养基初始pH4.5。在上述培养条件下将PCu-9静置培养至第6d,木质素降解酶系中的LiP酶活力可达到2013.59U/L,比未优化时提高了23.41%;MnP酶活力可达到353.42U/L,比未优化时提高了27.97%。(3)将选育菌株PCu-9在秸秆、木粉和甘蔗渣3种不同的固态发酵培养基中培养6d后分别对4种不同的染料刚果红、酸性品红、萘酚绿B和孔雀石绿进行脱色,结果显示:在秸秆固态发酵培养基中,选育菌株PCu-9对染料的脱色效率与原出发菌株一致,均为萘酚绿B>刚果红>孔雀石绿>酸性品红,但选育菌株PCu-9对4种染料的脱色效果均优于出发菌株;在木粉固态发酵培养基中,选育菌株PCu-9对染料的脱色效率与原出发菌株也一致,均为萘酚绿B>刚果红>酸性品红>孔雀石绿,且选育菌株PCu-9对4种染料的脱色效果也均优于出发菌株;在甘蔗渣固态发酵培养条件下,选育菌株PCu-9对染料的脱色效率为萘酚绿B>刚果红>酸性品红>孔雀石绿,不同于出发菌株对染料的脱色效率刚果红>萘酚绿B>酸性品红>孔雀石绿,但选育菌株PCu-9对4种染料的脱色效果同样也均优于出发菌株;对于染料刚果红和酸性品红来说,选育菌株PCu-9在甘蔗渣固态发酵培养基中对它们的脱色效果最好,脱色率分别可以达到95.69%和88.70%;对于染料萘酚绿B和孔雀石绿来说,选育菌株PCu-9在秸秆固态发酵培养基中对它们的脱色效果最好,脱色率分别可以达到100%和72.35%。
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