蛤蚧作为名贵的中药材，其原动物为壁虎科动物大壁虎，已有2000多年的药用历史。近年来，由于环境的破坏和人类的捕捉，野生大壁虎的数量急剧下降。另一方面，蛤蚧作为一种常用中药材，市场需求量呈上升趋势。如此情形下，导致越来越多的蛤蚧伪品充斥市场。为了消费者的利益和中药材的质量监管，正确的蛤蚧鉴定方法势在必行。传统的蛤蚧鉴定方法主要是基于形态、显微及理化鉴定方法，但存在着明显的不足。分子生物学的发展为传统动物类中药材的鉴定提供了新的技术，较之传统方法，分子鉴定更为准确、快捷而凸显其优势(Joshi et a1．，2004)。其中，物种鉴定的前沿技术即DNA条形码(DNA barcoding)，以其易于操作、准确、可标准化等特点在同领域得到了普遍的认同。　　 由此，本研究基于DNA条形码技术，选用蛤蚧及众多伪品为实验材料，尝试建立中药材蛤蚧的准确、简捷鉴定方法。此外，基于DNA条形码序列及药用亲缘学的理论，尝试对红、黑蛤蚧及其药效差异进行再评估。本论文共涉蛤蚧微型DNA条形码引物筛选、DNA条形码技术鉴定蛤蚧及伪品、DNA条形码一特异性PCR技术鉴定蛤蚧及伪品、基于DNA条形码序列的红黑蛤蚧药效再评估等四部分。各部分主要研究内容及结论简述如下：①蛤蚧微型DNA条形码引物筛选：　　 通过对自行实验获得的序列和GenBank上相关序列进行比对分析，筛选出适合于扩增蛤蚧及伪品微型DNA条形码引物。借助引物设计软件，经过多序列比对，设计了两对引物mini-barcode F2，mini-barcode R2:mini-barcode F3，mini-barcode R3，并用这两对引物和目前已报道的微型条形码引物PCR扩增蛤蚧及伪品61个样本。其中mini-barcodc F2，mini-barcode R2和mini-barcode F3，mini-barcode R3这两对引物的PCR扩增成功率分别为100％和90%。而目前已报道的微型条形码引物PCR扩增蛤蚧及其伪品得到了长度约500bp非微型条形码序列片段。由此得出目前已报道的微型条形码引物不适用于扩增蛤蚧及伪品，故本研究筛选出了适合于蛤蚧及伪品的微型条形码引物。②DNA条形码技术鉴定蛤蚧及伪品：　　 本研究使用DNA条形码技术鉴定蛤蚧及伪品，选择57个蛤蚧及伪品样本作为实验材料，实验扩增蛤蚧及伪品的标准条形码和微型条形码的序列，同GenBank上相关序列进行比对分析，发现蛤蚧同伪品间的序列差异明显高于蛤蚧种内差异(标准条形码：35% vs3%:微型条形码：33.5% vs4%)。结果表明标准条形码和微型条形码可有效的鉴定蛤蚧及伪品。③DNA条形码一特异性PCR技术鉴定蛤蚧及伪品：　　 以DNA条形码序列为基础，探讨DNA条形码一特异性PCR技术鉴定蛤蚧及伪品的可行性。选用自行扩增的16条DNA条形码序列为引物设计依据序列设计了一对DNA条形码一特异性引物COISF，COISR，同时从GenBank上下载30条序列，设计了 CytbSF，CytbSR:16SrRNASF，16SrRNASR:12SrRNASF，12SrRNASR三对DNA条形码一特异性引物，因此共用四对DNA条形码特异性引物分别扩增蛤蚧及伪品实验样本。在复性温度为65℃时，四对引物都出现了理想的结果，即蛤蚧正品出现了扩增条带，而伪品没有扩增条带。同时对市售的蛤蚧商品进行了检测，在所供的7号标本中，有4号为蛤蚧正品，其余3号为蛤蚧伪品。结果表明本研究所设计的DNA条形码一特异性引物可快捷、准确的鉴定蛤蚧及伪品。④基于DNA条形码序列的红、黑蛤蚧药效再评估：　　 基于DNA条形码序列信息，运用药用亲缘学原理，对红、黑蛤蚧药效情况进行再评估。获取DNA条形码序列信息，采用MP法构建系统发育树，基于系统发育树判断红、黑蛤蚧之间的亲缘关系，并依此探讨红、黑蛤蚧及药效之间的关系。实验结果表明红、黑蛤蚧在系统树上相互嵌合在一起，不能各自形成独立分支（单系），来自不同产地的红、黑蛤蚧分别构成了4个独立支系，这与红、黑蛤蚧截然可分的概念相悖。由此可知红蛤蚧可能具有和黑蛤蚧相似的药效，不同地区的红、黑蛤蚧药效可能存在差异。本研究可为红、黑蛤蚧的药效及化学成分研究提供前瞻性的建议，即开展相关研究应基于亲缘关系，分别对不同产地红、黑蛤蚧样品进行分析。