论文部分内容阅读
交叉保护是目前植物病毒病防治中比较有效的策略。交叉保护的核心是弱毒疫苗的创制、疫苗寄主范围及接种时机的选择。黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）是雀麦花叶病毒科（Bromoviridae）黄瓜花叶病毒属（Cucumovirus）的成员,是三分体的单链正义RNA病毒。CMV主要借助蚜虫以非持久性的方式传播,也通过种子或者汁液摩擦等传播,是目前已知的寄主范围最广泛的病毒之一,在弱毒疫苗的研究中具有极大潜力。本研究主要进行了部分种类植物种子是否携带CMV的检测、不同CMV分离物的致病力比较并分析决定致病力差异的区段,为CMV弱毒疫苗的研制和疫苗寄主范围提供材料和数据支持。通过Western blot和RT-PCR对2种豆科植物和3种茄科植物约550粒种子中携带CMV情况进行检测,结果表明辣椒、番茄、花生的所检测品种的种子中不携带CMV;茄子的所检测品种的种子中携带CMV率为3.3%;豇豆的所检测品种的种子中携带CMV率较高,高达为52.5%,暗示在豇豆中利用弱毒疫苗进行CMV病毒病防治存在局限性。另外,在所检测的其他4种植物中可利用弱毒疫苗进行CMV病毒病的防治。在本氏烟上进行了2种CMV分离物的致病性比较。CMV烟草分离物(CMVFny)侵染本氏烟表现强致病性,具体表现为植株严重矮化,叶片皱缩、花叶。CMV花生分离物(CMVTA-pe)侵染本氏烟表现弱致病性,植株无明显发病症状。通过两种分离物基因组间RNA 1、RNA 2和RNA 3的不同组合接种,发现CMVTA-pe的RNA 1或RNA 2被CMVFny的RNA 1、RNA 2替换后,均表现强致病性,说明CMVTA-pe在本氏烟上的弱致病性主要由其RNA 1和RNA 2决定,其中RNA 2的作用尤为关键。说明CMV不同分离物存在寄主相关的致病性分化,且RNA 2是主要决定区段。利用RACE及RT-PCR技术克隆CMV牛矢果分离物(CMVNSG)的全基因组序列。用DNAMAN进行序列比对发现CMVNSG分离物的序列与CMV其它分离物基因组整体差异较大,RNA 1与大部分分离物同源性较低,在74.18%-78.33%,与少数分离物同源性较高,在97.82%-98.99%;RNA 2与大部分分离物同源性较低,在69.10%-75.28%,与少数分离物同源性较高,在98.29%-98.62%;RNA 3与大部分分离物同源性较低,在71.49%-72.98%,与少数分离物同源性较高,在96.93%-98.92%。系统进化树分析发现CMVNSG分离物与CMV其它分离物亲缘性低,其中在RNA 1或RNA 2的系统进化树中均是独自形成一个分支。暗示CMVNSG分离物是一个CMV新分离物。本研究为基于CMV的弱毒疫苗创制及应用提供了研究材料和数据支持。