目的：构建靶向人睾丸基因TDRG1的shRNA重组质粒表达载体,并研究其在人恶性畸胎瘤细胞(NTERA-2)的表达。筛选出高效且特异性抑制TDRG1基因表达的重组质粒表达载体,为下一步研究TDRG1基因对睾丸肿瘤生物学行为的作用奠定基础。方法：设计合成有短发夹结构靶位TDRG1基因的寡核苷酸,经退火成双链,克隆至载体pGPU6/GFP/Neo中,构建了TDRG1-shRNA表达载体,得到重组质粒TDRG1-shRNA486, TDRG1-shRNA738, TDRG1-shRNA921和一个阴性对照,转化入JM109大肠杆菌,抽提质粒,进行酶切和测序鉴定,分别使用LipofectamineTM2000介导转染重组质粒shRNA至人恶性畸胎瘤细胞中,再应用Real Time-PCR法检测转染后人恶性畸胎瘤细胞TDRG1mRNA的表达水平。结果：酶切结果表明,所有质粒均为阳性重组质粒,经基因测序证实,插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致。同时筛选到转染TDRG1-shRNA486的人恶性畸胎瘤细胞TDRG1基因的mRNA表达水平明显抑制(p<0.01),并对TDRG1基因mRNA抑制效率为84.89%。结论：成功构建了人睾丸特异性表达基因TDRG1的shRNA表达载体,三组TDRG1-shRNA均可在NTERA-2细胞内成功表达,而其中TDRG1-shRNA486抑制目的基因的效果最好。图14副,表12个,参考文献41篇。