目的：人乳头瘤病毒(HPV)是一种在人群中极易传播的病毒，近年来其感染急剧增多；它不仅能通过性接触传播，而且还可以依靠其他直接或间接的途径交叉传染，对公众健康危害较大。HPV感染和多种皮肤粘膜增生、息肉、癌前及癌性病变发生发展关系密切。HPV型别众多，不同型别的致病危害性不同，HPV6、11、16、18、31、33、35、38、58等型与多种头颈部、消化、呼吸、泌尿及生殖系统的良恶性病变相关，而且某些位点突变能增强其致癌能力。最新研究显示99％以上的女性生殖系统最常见的恶性肿瘤宫颈癌患者存在HPV感染。宫颈癌恶性程度高，我国是宫颈癌高发区，每年的新增患者达十几万，严重威胁着妇女的健康。宫颈癌的发生发展与HPV感染及基因突变密切相关。HPV不仅危害极大而且其感染不易早期发现，目前尚无经济、有效、易推广的检测方法，因此建立一种实用的基因检测方法对于HPV相关恶变疾病的防治有着十分重大的意义。本课题旨在基于模板指 第四军医大学硕士学位论文导的染料终止子掺入一荧光偏振检测技术(TDI一FP)建立一种快速、高通量、自动化及低成本的技术平台用于HPV感染及相关良恶性病变的临床筛查、早期诊断及预后判断，为HPV相关疾病的预警、防治原则的制定提供必须的生物学信息及有临床应用前景的检测技术。方法:TD工一FP技术是一种在聚合酶链反应的基础上具备液相探针杂交和碱基掺入三重特异反应的检测新方法，具有极高的特异性和敏感性。在TD工一FP技术的基础上分别建立和优化了HPV分型检测系统和HPv16E7基因647位点(第29位密码子)突变和人H一ras基因1698位点(第12位密码子)突变检测系统;HPv分型检测主要针对常见的HPV6、11、16、18和58型，先用通用引物GPS+/6+扩增HPV6、11、16、18和58的Ll基因区域，然后以HPv6、11、16、18、58的型特异性引物，进行探针杂交和荧光素终止子掺入反应，通过荧光偏振检测对扩增产物进行HPV分型，同时对182例宫颈病变组织临床标本进行了检测应用与验证。在TDI一FP分型系统建立优化的基础上于HPV16阳性人群标本中用TDI一FP点突变检测系统对HPV 1 6E7 647位点和人H一ras1698位点突变进行了检测应用，初步验证了基因突变检测对协助进一步确定癌变超高危人群的作用与意义。结果:本研究成功建立了具有重复性好、广阔临床应用前景的常见HPv分型检测系统和恶变相关基因点突变检测系统。对组织标本能检测出常见的6、11、16、18和58型5种HPV的DNA，能准确地检测出HPV 1 6E7 647位和H一ras 1698位的点突变。经测序验证一致率达100%。本研究结果显示HPV16和HPV18是宫颈癌中的主要型别，HPV16E7 647位点突变和H一ras 1698位突变在不同性质病变中的突变率有明显不同。结论:本研究建立的HPV TD工一FP分型检测系统和恶变相关点突变检测系统能够运用于对HPV感染相关良恶性增生病变高危人群的第四军医大学硕士学位论文筛查，对恶性病变危险度的进一步预警分析，是一种高灵敏度、高特异性、高通量及实用性强的检测系统。本研究结果提示HPv16E7基因647位点突变可能是恶变的高危因子;同时合并H一ras基因第1698位点突变可能提示肿瘤的发生;利用该变异检测系统进一步扩大标本量和地区及更多相关基因研究将会为HPV感染相关疾病的防治提供更加丰富的信息，为生物治疗、疫苗的研制奠定基础，.为相关疾病的早期发现及预警提供高效的.技术平乙入1二10