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目的：肺癌是一种高度恶性的肿瘤，其发病率高，预后差，严重威胁人类健康和生命。近年来，许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均显著提高。肺癌的治疗包括手术治疗，放射治疗，化学治疗和免疫治疗，其中手术治疗是公认的早期肺癌治疗的首选方法，在失去手术机会的肺癌病人中化疗是其主要治疗方法（超过90％的肺癌需要化疗治疗），近来免疫治疗也进展迅速并进入临床应用。有研究表明，在肺癌细胞培养上清中血管内皮生长因子（VEGF）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、白细胞介素-10（IL-10）等免疫抑制分子水平增高。肿瘤细胞分泌免疫抑制分子抑制机体免疫功能，是肿瘤细胞免疫逃逸并使得肿瘤得以发生、发展和转移的重要机制。我们是否可通过某些物质拮抗肿瘤细胞分泌免疫抑制分子，从而达到治疗肿瘤的目的值得研究。灵芝是我国传统中药，有2000多年的用药历史。现代研究表明灵芝多糖(ganoderma lucidum polysaeeharides，Gl-PS)是灵芝的主要活性成分之一，可作用于免疫系统，提高免疫功能，从而发挥抗肿瘤作用；亦有少数实验显示灵芝多糖可直接抑制肿瘤细胞；而通过拮抗肿瘤产生免疫抑制物得以发挥抗肿瘤的作用机制尚未完全阐明。有实验表明，灵芝多糖可拮抗B16F10黑色素瘤细胞分泌免疫抑制分子，但灵芝多糖是否具有拮抗其他肿瘤细胞分泌免疫抑制分子的作用尚需进一步确定。本实验选用LA795肺癌细胞，探讨灵芝多糖对这种肿瘤细胞分泌免疫抑制分子的影响，拓展对灵芝多糖抗肿瘤机制的认识，为肺癌的免疫治疗提供新思路。方法：1.细胞来源：本实验采用的LA795细胞是一种来源于小鼠的肺腺癌细胞系。2.实验分组及干预：实验依据培养LA795肺癌细胞的RPMI-1640完全培养基中所含灵芝多糖浓度不同进行分组，设0.2μg/ml、0.8μg/ml、3.2μg/ml、12.8μg/ml五个实验组，以完全培养基为空白对照。3.采用免疫ELISA方法，检测各组细胞VEGF、TGF-β1、IL-10因子的表达情况。4.采用RT-qPCR技术，检测各组细胞VEGF、TGF-β1、IL-10在基因转录水平的表达差异。5.数据统计分析：应用SPSS17.0统计学软件，对结果进行单因素方差分析，p<0.05表示差异有统计学意义。结果：1.从表达量和基因水平检测灵芝多糖对LA795肺腺癌细胞分泌VEGF的影响：在不同浓度灵芝多糖（0μg/ml、0.2μg/ml、0.8μg/ml、3.2μg/ml、12.8μg/ml）作用下，各组LA795肺癌细胞连续培养48h，应用ELISA技术检测显示，LA795肺癌细胞培养上清中VEGF表达水平分别为147.98±0.28、120.25±14.24、103.11±10.57、91.27±13.62、84.66±10.41，以空白对照组的VEGF的表达水平最高，随灵芝多糖浓度的不断增高，LA795肺癌细胞VEGF表达水平逐渐降低。经单因素方差分析，差异有显著性(F=15.912，P<0.005)。0μg/ml组与0.2μg/ml组、0.8μg/ml组、3.2μg/ml组、12.8μg/ml组之间比较,差异均有显著性(P<0.05)。应用RT-qPCR技术检测显示,LA795肺癌细胞VEGF mRNA的表达水平分别为1.00±0.00、0.67±0.24、0.68±0.24、0.48±0.21、0.50±0.23，以空白对照组的VEGF mRNA的表达水平最高，应用灵芝多糖浓度后，LA795肺癌细胞VEGF mRNA表达水平降低。经单因素方差分析，差异有显著性(F=3.034，P<0.1)。0μg/ml组与3.2μg/ml组、12.8μg/ml组之间比较，差异有显著性(P<0.05)。结果显示灵芝多糖可抑制LA795肺癌细胞VEGF基因转录。2.从表达量和基因水平检测灵芝多糖对LA795肺癌细胞分泌TGF-β1的影响：在不同浓度灵芝多糖（0μg/ml、0.2μg/ml、0.8μg/ml、3.2μg/ml、12.8μg/ml）作用下，各组LA795肺癌细胞连续培养48h，应用ELISA技术检测显示，LA795肺癌细胞培养上清中TGF-β1表达水平分别为98.78±12.02、87.01±5.97、71.98±8.54、58.96±13.24、54.08±14.84，以空白对照组的TGF-β1的表达水平最高，随灵芝多糖浓度的不断增高，LA795肺癌细胞TGF-β1表达水平逐渐降低。经单因素方差分析，差异有显著性(F=8.152，P<0.005)。0μg/ml组与3.2μg/ml组、12.8μg/ml组之间比较，差异有显著性(P<0.05)。应用RT-qPCR技术检测显示，LA795肺癌细胞TGF-β1mRNA的表达水平分别为1.00±0.00、1.24±0.25、0.84±0.22、0.56±0.15、0.46±0.06以空白对照组和0.2μg/ml组的TGF-β1mRNA的表达水平最高（二组之间差异无统计学意义，P>0.005），随灵芝多糖浓度的不断增高，LA795肺癌细胞TGF-β1mRNA表达水平逐渐降低。经单因素方差分析，差异有显著性(F=11.145，P<0.005)。0μg/ml组与3.2μg/ml组、12.8μg/ml组之间比较，差异有显著性(P<0.05)。结果显示灵芝多糖可抑制LA795肺癌细胞TGF-β1基因转录。3.从表达量和基因水平检测灵芝多糖对LA795肺癌细胞分泌IL-10的影响：在不同浓度灵芝多糖（0μg/ml、0.2μg/ml、0.8μg/ml、3.2μg/ml、12.8μg/ml）作用下，各组LA795肺癌细胞连续培养48h，应用ELISA技术检测显示，LA795肺癌细胞培养上清中IL-10表达水平分别为57.04±3.45、46.53±4.23、41.54±1.59、41.54±4.21、36.49±0.80，以空白对照组的IL-10的表达水平最高，应用灵芝多糖浓度后，LA795肺癌细胞IL-10表达水平降低。经单因素方差分析，差异有显著性(F=17.975，P<0.001)。0μg/ml组与0.2μg/ml组、0.8μg/ml组、3.2μg/ml组、12.8μg/ml组之间比较，差异均有显著性(p<0.05)。应用RT-qPCR技术检测显示，LA795肺癌细胞IL-10mRNA的表达水平分别为1.00±0.00、0.98±0.09、0.64±0.17、0.36±0.10、0.39±0.10，空白对照组的IL-10mRNA的表达水平最高，应用灵芝多糖后，LA795肺癌细胞IL-10mRNA表达水平降低。经单因素方差分析，差异有显著性(F=24.319，P<0.001)。0μg/ml组与0.8μg/ml组、3.2μg/ml组、12.8μg/ml组之间比较，差异均有显著性(P<0.05)。结果显示灵芝多糖可抑制LA795肺癌细胞IL-10基因转录。结论：1. LA795肺癌细胞可分泌免疫抑制分子VEGF、TGF-β1、IL-10。2.灵芝多糖可下调LA795肺癌细胞分泌免疫抑制分子VEGF、TGF-β1、IL-10。