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hCGβDNA疫苗诱导细胞毒杀伤效应,保护实验小鼠抵抗肿瘤的发生和生长早有报道。为探讨rmCGβ基因免疫预防肿瘤的可能性,我们建立了表达CGβ类似蛋白的小鼠骨髓瘤模型。利用这个基因修饰的肿瘤模型,pCR3.1-rmCGβ基因免疫在小鼠体内引发的免疫应答和抗肿瘤效果得到了客观评价。
通过脂质体转染和抗性稳定筛选,挑选出表达小鼠CGβ类似蛋白的小鼠骨髓瘤SP2/0细胞被进一步的放大培养,接种转基因骨髓瘤细胞到Balb/c小鼠皮下部位建立了动物肿瘤模型。作为对照,稳定表达无关病毒HN和neo蛋白(空质粒)的SP2/0骨髓瘤肿瘤模型也同时被建立。小鼠连续三次免疫20μgpCR3.1-rmCGβ,然后接种106肿瘤细胞。ELISA检测抗体表明在肿瘤接种之前基因免疫激发的抗原特异性抗体以IgG1类型为主,而当表达靶抗原的肿瘤攻击之后,血清中IgG2a型抗体含量上升。同时,在肿瘤细胞攻击前,淋巴细胞主要释放IL-4细胞因子,而肿瘤攻击后IFNγ、TNFα和IL-2在淋巴细胞中表达量增加。抗体和细胞因子实验均显示在靶抗原表达型肿瘤攻击前后,基因疫苗激发的CD4+免疫反应发生了从Th2向Th1型的转变。
rmCGβ基因疫苗可以一定程度的预防CGβ表达型骨髓瘤的生长,但是随着肿瘤的持续生长,疫苗的抗肿瘤作用逐渐减弱。
hCGβ在多数乳腺痛病人的肿瘤细胞中有表达,然而胞内hCGβ对乳腺肿瘤形成和生长的影响机理尚不清楚。通过转染,药物抗性和流式细胞筛选技术,我们建立了稳定表达hCGβ的小鼠乳腺癌模型。肿瘤移植模型表明胞内hCGβ可以抑制乳腺实体肿瘤的生长,与对照组相比,肿瘤重量减少了86-88%。分子印记显示hCGβ诱导p53表达增加,进一步的通过p21抑制Cdk2,阻滞细胞周期影响细胞增殖;p53上调促使Bax分子的表达增加促进肿瘤细胞的凋亡;p53还通过控制MMP9和VEGF的分泌控制新血管的生成;另一方面,细胞内hCGβ不能自分泌出细胞外影响E2和P4的释放,即细胞内hCGβ不能通过内分泌激素途径抗肿瘤。
利用表达hCGβ的小鼠乳腺肿瘤模型,我们评价了rmCGβDNA免疫治疗小鼠乳腺癌的效果,结果显示疫苗可以有效的抑制乳腺原位肿瘤的生长和肺转移,疫苗治疗使乳腺肿瘤的重量减少了69-72%。在免疫治疗的肿瘤中,CD4+和CD8+淋巴细胞的特异性浸润增多,而且伴随着IFNγ和IL-4细胞因子分泌的增加。这些结果表明细胞介导的免疫应答在疫苗激发的治疗肿瘤效应中发挥重要作用。
本文在小鼠肿瘤模型中研究了hCGβ抑制乳腺癌的分子机制,探讨了rmCGβDNA疫苗免疫防治CGβ表达型骨髓瘤和乳腺癌的免疫机理。为人类肿瘤提供了一个潜在的免疫防治方法。