LPA、TGF-β1对体外培养的恒河猴视网膜色素上皮细胞生物学特征的影响研究

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【目的】研究溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid, LPA)和转化生长因子β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)对体外培养的恒河猴视网膜色素上皮细胞(rhesus retinal pigment epithelium, rRPE)超微结构、增殖活力及吞噬功能的影响。【方法】取健康的成年恒河猴眼球,用酶消化法获取RPE 细胞,含15%胎牛血清的DMEM/F12 培养液培养,细胞接近融合时进行传代。取第3 代细胞进行实验。用LPA 和TGF-β1 共培养,采用MTT 法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞周期并固定行透射电镜检查。将细胞培养至第3 代,倒置相差显微镜下观察细胞内没有色素后,加入外源色素用酶联免疫检测仪定量分析吞噬能力。【结果】TGFβ1组加药第二天开始吸光度明显低于对照组(P <0.05),LPA 组吸光度明显高于对照组(P <0.05)。TGFβ1组G1 期细胞数明显高于对照组(P <0.05),G2/M 期细胞数低于对照组(P <0.05),而S 期没有明显变化(P﹥0.05)。LPA 组G1 期细胞数明显低于对照组(P <0.01),S 期细胞数明显高于对照组(P <0.01),而G2/M 期没有明显变化(P﹥0.05)。TGF-β1及LPA 对rRPE 细胞吞噬功能与对照组相比均无明显区别(P﹥0.05)。对照组与LPA 组细胞超微结构无明显异常改变。TGF-β1组大多数细胞结构无明显异常,部分细胞见胞核呈分叶状。染色质呈团块状分布,部分细胞见较多的内质网或线粒体扩张,但未见细胞坏死或凋亡小体。加入色素组的细胞内可见大量的色素,部分细胞内见消化不完全的色素颗粒。【结论】LPA 同时作用于rRPE 细胞周期的G1→S 转折点和G2→M 转折点,促进细胞的增殖。其对细胞的超微结构和吞噬功能没有明显影响。TGF-β1 是
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