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背景： 伊马替尼（imatinib，IM）等酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor,TKI）可以特异性抑制BCR-ABL1融合基因产物活性，从而抑制肿瘤细胞增殖。但20％～30%患者服药后出现TKI耐药，主要原因之一是BCR-ABL1激酶结构域（kinase domain，KD）出现点突变。目前常用Sanger测序法（Sanger sequencing，SS）检测融合基因突变位点，但其敏感性较低，无法识别突变丰度低于15%～20%的低水平突变，同时不能分析多个突变种群的克隆结构。二代测序技术(next-generation sequencing，NGS）通过增加测序通量，检测突变灵敏度可达1%以上，并且在多数情况下能揭示复杂的克隆纹理。 目的： 1.研究NGS技术能否准确检测慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）患者BCR-ABL1 KD低水平突变，建立检测BCR-ABL1融合基因突变高灵敏度的新方法； 2.进一步揭示多突变种群的克隆结构，并讨论这种高敏感度的基因突变检测方法与临床相关性。 材料与方法： 收集我院22名经TKIs序贯治疗失去主要分子学反应（MMR：BCR-ABL1≤1%IS）的CML患者外周血样本40例/次进行分析。 （1）取患者外周血2ml，Trizol法提取总RNA，逆转录成cDNA后采用PCR扩增BCR-ABL1KD，回收纯化PCR产物。 （2）分别采用SS和NGS两种测序方法检测BCR-ABL1KD基因突变，比较两者的差异并分析突变基因的克隆演变及TKIs耐药的相关性。 （3）采用TA克隆技术对特殊样本进行直接测序，验证克隆群体的复杂性（复合突变与多克隆突变）。实验数据均采用SPSS19统计软件进行数据分析处理，P＜0.05为差异具有统计学意义。 结果： 1.NGS共检测出12种与TKIs临床耐药相关突变，分别为：M244V、Y253H、E255A/K、E292V，V299L，T315I，F359C/I，F317L，H396R，C475Y；SS共检出8种耐药相关突变：E450A/K，F359C/I，T315I，V299L，Y253H，M244V。 2.7例样本经SS检测阴性而NGS检测出10处点突变，丰度在1.20%～33.18%，其中8个突变丰度已超出Sanger测序检测的最低阈值（15%～20%），表明NGS敏感度明显高于SS（P＜0.05）。 3.在12例多个突变样本中发现至少8例属于复合突变，其中发现两种未曾报道的复合突变：F359C/E450A和T315I/E450A。 结论： 1.SS法可导致样本BCR-ABL1融合基因突变分类错误或低估，其中丰度在1%～15%的基因突变可经NGS法检测。 2.通过NGS对ABL1激酶结构域突变动态监测及其克隆演变，早期预测TKI的治疗反应，为患者早期更换药物行个体化治疗提供依据。