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采用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术检测14种高危型人类乳头瘤病毒(HR-HPV)，探讨质谱技术应用于HPV检测的临床应用价值。方法利用MALDI-TOF MS技术检测14种不同浓度的HPV质粒标准品，确定系统的特异性和灵敏度。通过质粒验证后用MALDI-TOF MS方法检测509例门诊病例中的HR-HPV感染情况；并同时对其中72例具有病理学诊断结果的临床样本用第2代杂交捕获方法(Hybrid CaptureⅡ，HC2)进行检测，比较MALDI-TOF MS和HC2方法的一致性。结果MALDI-TOF MS检测方法中14型HR-HPV质粒标准品均能被检测出来且各型的灵敏度在10-1000copies/ul之间。509例门诊样本中HR-HPV总感染率为56.58％(288/509)，其中感染率在5％以上的有8种亚型，分别为HPV16(60.07％，173/288)、HPV18(30.56％，88/288)、HPV39(20.83％，60/288)、HPV45(11.81％，34/288)、HPV52(11.81％，34/288)、HPV31(11.46％，33/288)、HPV35(5.9％，17/288)、HPV58(5.56％，16/288)；多重感染占49.65％(143/288)，二重感染最为常见。细胞学检查中HR-HPV感染的比例随病变级别上升逐渐增加，与正常和炎性组相比具有统计学意义(P＜0.05)。MALDI-TOF MS检测技术对组织学检测中高级病变检出的灵敏度为87.50％，特异性为45.49％，阳性预测值为75.34％，阴性预测值为98.19％。MALDI-TOFMS与HC2检测技术的一致度为97.22％。结论MALDI-TOF MS检测技术具有高灵敏度，高特异度的优点，适用于临床HPV分型检测，尤其适用于大规模的宫颈筛查和流行病学调查项目。