为了阐明鸭主要组织相容性复合体Ⅰ(Anpl-MHCⅠ)蛋白的结构特征，进一步建立Anpl-MHCⅠ相关四聚体技术，本文表达与纯化了鸭MHCⅠ和β2m基因并测定了其蛋白二级结构。根据Anpl-MHCⅠ和Anpl-β2m基因序列设计了引物对，亚克隆了三类Anpl-MHCⅠ基因的胞外区和Anpl-β2m基因的成熟肽。随后，用SOE-PCR技术将45bp的底物肽(BSP)分别连接到了Anpl-MHCⅠ的羧基端(Anpl-MHCⅠ-BSP)。结果分别得到了三类861bp、864bp和864bp的Anpl-MHCⅠ-BSP以及一类297bp的Anpl-β2m片段。测序结果显示上述序列均与其cDNA模板一致，且BSP基因序列正确地加到了Anpl-MHCⅠC端。 随后，将Anpl-MHCⅠ-BSP和Anpl-β2m基因片段分别插入原核表达载体pMAL-p2X，并在E.coliTB1中进行了可溶性表达。麦芽糖结合蛋白(MBP)重组Anpl-MHCⅠ-BSP和Anpl-β2m蛋白被分别命名为MBP-MHCⅠ-BSP*UAA01、MBP-MHCⅠ-BSP*UCA01、MBP-MHCⅠ-BSP*UDA01和MBP-β2m。SDS-PAGE分析显示三类Anpl-MHCⅠ融合蛋白大小为73.4kDa；Anpl-β2m融合蛋白大小为53.2kDa。然后采用Amylose树脂亲和层析纯化融合蛋白，并进行Western-blot杂交，结果均在相应的73.4kDa和53.2kDa处出现特异带。随后将融合蛋白进行FactorXa蛋白酶切鉴定，结果显示融合蛋白都能被正确切割为MBP单体和Anpl-MHCⅠ-BSP以及Anpl-β2m目标蛋白。 最后，用圆二色谱(CD)测定了各类Anpl-MHCⅠ-BSP和Anpl-β2m蛋白的二级结构，并同源模建了其三级结构(3D)。CD结果显示三类Anpl-MHCⅠ-BSP蛋白均呈典型的α螺旋结构，其α螺旋、β折叠、转角、随机卷曲分别为59～60个氨基酸、57～71个氨基酸、61～70个氨基酸、96～104个氨基酸。Anpl-β2m蛋白呈典型的β折叠，其α螺旋、β折叠、转角、随机卷曲分别为0aa、50aa、23aa和26aa。同源模建表明，Anpl-MHCⅠ和Anpl-β2m蛋白3D结构与人和鼠3D结构相似，结构的保守性大于氨基酸的同源性。 综上所述，本研究表达、纯化了三类Anpl-MHCⅠ和Anpl-β2m蛋白并测定了其二级结构，拓展了鸭MHC的研究，为四聚体技术测定抗原表位打下了基础。