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目的:探讨高盐培养环境对小鼠原代血管内皮细胞和巨噬细胞功能的影响。 方法: 1、体外无菌条件下培养小鼠血管内皮细胞和巨噬细胞。将血管内皮细胞分为不同浓度NaCl、MgCl2、 Na-G、Mg-G组及正常对照组。 2、采用MTT法检测不同浓度NaCl、MgCl2、Na-G、Mg-G对血管内皮细胞增殖活性的影响;采用Western Blot方法检测不同浓度NaCl对血管上皮细胞间连接蛋白Occludin和SGK1的影响;应用Trans well培养方法检测氧化型低密度脂蛋白及高盐环境对于主动脉上皮细胞通透性的影响。 3、将巨噬细胞分为不同浓度NaCl处理组(10mmol/L、20mmol/L和40mmol/L组)和正常对照组,采用流式细胞术(FACs)的方法检测不同浓度NaCl对巨噬细胞CD36表达的影响;采用共聚焦方法检测不同浓度NaCl对巨噬细胞吞噬氧化型低密度脂蛋白的影响;通过FACs方法检测不同浓度NaCl(2mmol/L、4mmol/L和8mmol/L)对巨噬细胞型别转化的影响。 结果: 1、为了证实NaCl中是Na+还是Cl-对血管上皮细胞的影响,我们选择了排除方法,其结果证明,NaCl在一定浓度范围内Na+对血管上皮细胞起着主要作用; 2、Western Blot结果显示随着NaCl浓度的升高,连接蛋白Occludin表达降低,差异显著(P80mmol/L<0.05,P160mmol/L<0.05,P320mmol/L<0.01);而SGK1的表达增加,但无统计学意义; 3、Trans well结果显示,与单纯Dil-ox-LDL对血管内皮细胞相比,加入NaCl后对上皮细胞连接的破坏作用更为明显,并存在剂量依赖性; 4、FACs的结果显示,NaCl浓度为40mmol/L时对巨噬细胞清道夫受体CD36表达的影响差异明显,而低浓度无差异;且随NaCl培养浓度增加,巨噬细胞吞噬Dil-ox-LDL后形成泡沫细胞的数量也增加,与对照组细胞相比差异显著(P40mmol/L<0.001); 5、FACs结果显示,与对照组相比较,随着NaCl浓度的增加,M1的细胞比例在2mmol/L浓度达到高峰后逐渐减少,而M2细胞比例在2mmol/L浓度出现小幅回落后逐渐增加。 结论: 1、体外高盐环境下,血管内皮细胞活性下降,对血管内皮细胞间连接有破坏作用,且存在剂量依赖性; 2、体外高盐抑制巨噬细胞向M1转化,促进巨噬细胞向M2转化; 3、高盐环境增强巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的吞噬能力,不是通过配体-受体结合发挥作用。