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尽管近年来对AMI本质和临床防治有了深入的认识,但是AMI发病率和死亡率仍未明显降低。近来研究表明,氧化应激与AMI时病理生理过程有关,氧化应激可造成AMI时心肌细胞坏死和心肌细胞凋亡。目前认为AMI是多基因表达异常引起的病理生理过程,基因芯片技术为研究AMI的疾病防治的分子机制提供了强有力的系统研究手段,可发现AMI异常表达的基因。这些基因的改变可能有助于认识AMI的发病机制,为将来AMI时心肌细胞损伤研究提供分子目标,也可能成为AMI疗效的评价指标。
目的:
1.了解AMI患者的临床特征及CTnT、CKMB、Mgb、WBC、ANC、DNAC、SCAI分型之间的相互关系及其临床意义。
2.通过Oligo基因芯片技术获取在AMI时心肌细胞损伤的过程中是否有OS相关基因的参与。
3.选取有明显上调的基因HSPD1和有明显下调的基因CAT,通过实时PCR检测来了解AMI患者PBMCs的HSPD1、CAT的mRNA表达量与临床的关系及其在AMI中的临床意义。
材料与方法:
1.研究对象
符合AMI诊断标准的病人11例。其中男性7例,女性4例,平均年龄61.44V13.70.岁(33~75岁),均确诊为ST段抬高型心肌梗死。健康对照组为与患者年龄、性别相匹配的健康志愿者10人,其中男性7人,女性3人,平均年龄53.00±6.55岁(35~61岁)。所有研究对象经检查排除感染、严重肝肾功能损害、严重凝血功能不全、粒细胞缺乏、肿瘤以及自身免疫性等疾病。11例病人样本分别取自病人入院诊治的第1d、第3d、第7d采肘静脉血;10例健康志愿者晨起空腹采静脉血。每次采血6ml,立即注入含0.05ml肝素的无菌离心管。
2.实验方法
PBMCs的分离采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法。采用Oligo基因芯片实验筛选AMI患者PBMCs相关基因,并选取有明显上调的基因HSPD1和有明显下调的基因CAT,并通过实时PCR验证。
3.统计学分析计量资料以均数±标准差(x±s)表示,各组间比较用方差分折(ANOVA)进行;计数资料用非参数检验,相关分析用简单相关分析法,以P<0.05为差异有统计学意义。通过台式扫描仪获得芯片图像,使用综合型GEArray表达分析配套软件(GEArrayExpressionAnalysisSuite)进行芯片数据分析。
结果:
1.AMI患者组外周血CKMB、CTnT、Mgb、WBC、ANC、HSCRP、GOT、GPT、LDH、HDLC均与健康对照组有显著差异(P<0.05)。
2.AMI患者组外周血CTnT、CKMB、Mgb分别与GOT、GPT、LDH之间均无相关性,CKMB、Mgb分别与WBC、ANC均呈明显的正相关性。CTnT与CKMB、Mgb三者之间均呈明显的正相关性。SCAI与DNCA之间呈正相关性。
3.应用基因芯片筛选AMI患者相关基因,全部有明显上调的基因共8个,即GADD45A、HSPD1、PRDX2、RAD50、TNFSF6、TRADD、DNAJB1、DNAJB2基因:全部有明显下调的基因共4个,即ATM、CAT、CCNG1、CYP1A1基因。
4.RealTimePCR结果表明:AMI患者外周血单个核细胞(PBMCs)的HSPD1基因mRNA表达量明显升高,表现上调;CAT基因mRNA表达量增加量低,表现下调。HSPD1与CTnT、WBC、ANC无相关性;但HSPD1与CKMB之间则呈正明显的相关性,HSPD1与Mgb也呈明显的正相关性;病例组CAT基因表达与CTnT、CKMB、Mgb、WBC、ANC无明显的相关性。HSPD1与CAT的mRNA表达量之间呈明显的正相关性。
结论:
1.AMI的发病过程受氧化应激和细胞凋亡相关基因的调控,基因芯片筛选技术为研究AMI时心肌细胞损伤复杂的分子机制提供了较好的研究手段。
2.AMI时HSPD1基因上调、CAT基因下调,它们可能共同参与了AMI时心肌细胞损伤的病理生理过程。