论文部分内容阅读
糖尿病末梢神经炎属于糖尿病的一种并发症，是慢性神经病变，也是糖尿病最常见的并发症之一。由于该病以手脚麻疼为主要表现，因此又称之为糖尿病末梢神经炎。末梢神经病变在糖尿病早期即可出现。其发病特点是肢体感觉障碍对称性出现，一般下肢病变几率多于上肢，早期表现为感觉异常，而晚期疼以疼痛为主要表现。主要表现为麻木、虫爬、蚁行、手足灼热或冰冷、触电感，甚至出现手套或袜样感等，也常伴有痛温觉减退或消失。另有一类表现是对称性的疼痛和感觉异常，疼痛以冷痛或灼痛为主，针刺样疼痛最为多见，疼痛程度剧烈甚至难以忍受，并且疼痛在夜间会加重。蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）是一组磷脂依赖性Ca2+激活的蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶。在多种免疫受体介导的信号转导中可被二酰甘油（DAG）和钙离子所激活。PKC是一种重要的第二信使，它通过将胞外信息传递到细胞内，从而调节细胞的生长发育、收缩、分泌、传导、膜通透性、细胞外基质和基因表达等等。在糖尿病状态下，这些功能均出现了异常。感觉神经元中的电压门控性钠通道（Voltage-gated sodium channels，VGSCs）在多种由周围神经损伤引起的慢性神经性疼痛病变中起着重要作用，如创伤、神经压迫、糖尿病神经病变、病毒或化学因素等引发的周围神经损伤。这些周围神经损伤所引发的神经性疼痛多表现为痛觉过敏、自发性疼痛、烧灼痛及痛觉异常等。已有的研究表明，VGSCs阻断剂能够治疗上述的神经性疼痛，如抗痉挛药、抗心律失常药及局部麻醉药等。近年来有大量关于由外周神经受损引起的脊髓背根神经节（dorsal root ganglion，DRG）钠通道改变的研究，发现DRG上的VGSCs被激活，VGSCs的种类、数量、分布及电生理特性均发生了改变，致使DRG神经元的兴奋性增加、放电频率增加、产生异位放电等，这些均与神经性疼痛密切相关。本文采用给大鼠腹腔注射STZ的方式复制糖尿病大鼠模型，再通过中药益糖康经口灌胃干预，观察其对糖尿病模型大鼠痛行为的影响，探索益糖康对糖尿病模型大鼠周围神经的保护作用；采用免疫组织化学和RT-PCR的方法，对中药益糖康干预后的糖尿病模型大鼠背根神经节组织中PKC、Nav1.7、Nav1.8、Nav1.9蛋白及其mRNA表达水平进行检测，探讨PKC在糖尿病发病过程中表达水平的变化及中药益糖康治疗糖尿病性周围神经病变的部分作用机制。目的：通过本实验研究益糖康对STZ大鼠蛋白激酶C（PKC）和钠离子通道Nav1.7、Nav1.8、Nav1.9的影响，从而探讨益糖康对糖尿病周围神经病变及其病理性疼痛的治疗作用。材料与方法：将体重200-250克的Wister大鼠随机分为空白对照组、安慰剂组和益糖康组，每组各10只。其中空白对照组给予生理盐水5ml每日一次灌胃，安慰剂组用链脲佐菌素（STZ）造模后给予5ml安慰剂每日一次灌胃，益糖康组用STZ造模后给予益糖康5ml每日一次灌胃，各组均灌胃6周。用热板实验检测大鼠痛行为的变化，确定STZ大鼠有糖尿病周围神经病变，产生病理性疼痛。用免疫组化、RT-PCR方法分别检测各组大鼠蛋白激酶C和Nav1.7、Nav1.8、Nav1.9的改变。结果：1.对痛行为的实验研究结果：安慰剂组大鼠在造模3周后，其出现舐足现象的时间开始不断延长，而益糖康组大鼠在造模4周后，才出现舐足时间延长现象，但在接下来的几周治疗中，其出现舐足现象的时间逐渐回落。安慰剂组与益糖康组比较，在第3-6周出现舐足现象的时间均有显著差异（P<0.01）。安慰剂组痛阈提高率明显高于益糖康组痛阈提高率。2.对蛋白激酶C的实验研究结果：免疫组化结果：安慰剂组大鼠背根神经节中PKC蛋白表达水平显著上调，益糖康组较安慰剂组PKC蛋白表达水平显著降低。RT-PCR结果：安慰剂组大鼠背根神经节中PKC mRNA表达水平显著上调，益糖康组较安慰剂组PKC mRNA表达水平显著降低（p＜0.01）。3.对钠通道的实验研究结果：免疫组化结果：安慰剂组大鼠背根神经节中Nav1.7、Nav1.8蛋白表达较空白对照组显著上调，而益糖康组Nav1.7、Nav1.8蛋白表达水平较安慰剂组显著下调。各组大鼠背根神经节中Nav1.9蛋白表达无显著差异。RT-PCR结果：安慰剂组大鼠背根神经节中Nav1.7、Nav1.8mRNA表达较空白对照组显著上调，而益糖康组Nav1.7、Nav1.8mRNA表达水平较安慰剂组显著下调。各组大鼠背根神经节中Nav1.9mRNA表达无显著差异。结论：1. STZ大鼠在造模三周后出现痛阈增高，说明STZ大鼠在造模三周后开始出现糖尿病周围神经病变。中药益糖康可显著缩短糖尿病性周围神经病变模型大鼠的舐足时间，说明中药益糖康对末梢神经特别是感觉神经具有一定的保护作用。2.PKC在糖尿病周围神经病变大鼠背根神经节中呈高表达，中药益糖康可有效下调糖尿病模型大鼠背根神经节中PKC蛋白的表达水平，有效抑制PKC的激活。下调糖尿病模型大鼠背根神经节中PKC蛋白的表达水平可能是益糖康治疗糖尿病性周围神经病变良好疗效的作用机制之一。3. Nav1.7、Nav1.8蛋白及mRNA在糖尿病周围神经病变大鼠背根神经节中呈高表达，益糖康可显著下调糖尿病模型大鼠背根神经节中Nav1.7，Nav1.8蛋白及mRNA的表达水平。益糖康对糖尿病模型大鼠背根神经节中Nav1.9蛋白及mRNA的表达水平影响不显著。下调背根神经节中Nav1.7，Nav1.8蛋白及mRNA的表达水平可能是益糖康治疗糖尿病周围神经病变良好疗效的又一作用机制。