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白芨属(Bletilla)是亚洲特有属,分布于缅甸北部经由中国到日本,全球约有6种,我国产四种。白芨属植物不仅具有较高的观赏价值,亦是我国重要的中药材之一。其中白芨[Bletill a striata(Thunb.)Reichb.f.]是该属植物中应用最广的一个种。目前栽培白芨主要用于园艺方面,作为草药的白芨假鳞茎几乎都来自于野生。因此野生的白芨资源由于过度的采挖、生境的破坏和片段化而急剧的减少。现在研究发现黄花白芨(Bletilla ochracea Schltr.)药效同白芨差别不大,而且在四川西部和北部产量较大,亦作白芨使用,可以在一定程度上缓解白芨需求的压力。微卫星标记以其独特的优势广泛应用于遗传多样性分析、遗传图谱的构建和群体遗传学等方面的研究。本研究的目的除了探索出黄花白芨组织快繁的适宜条件,为黄花白芨的工业化生产提供依据,同时也开发出白芨SSR扩增引物,为白芨遗传多样性的研究开辟道路,进而为其野生资源的保护、药材的道地性和合理开发利用提供科学依据。本论文一共分为三个部分:1.黄花白芨种子非共生萌发及幼苗发育研究试验采用L9(34)正交试验来研究成熟黄花白芨种子非共生萌发及幼苗发育条件,以筛选出较优技术路线。结果表明马铃薯,蔗糖,NAA,6-BA这四个因素对种子的萌发率的影响不显著,说明成熟种子对培养基的要求较低,容易萌发;但蔗糖和马铃薯对幼苗的发育产生显著影响,幼苗发育的较适条件是蔗糖添加量为10g/L,马铃薯添加量为100g/L,NAA的添加量为0,6-BA的添加量为0.5g/L。2.三种兰科植物种胚形态发育研究对兰科植物白芨属黄花白芨、石斛属流苏石斛、独蒜兰属独蒜兰种胚的形态发育进行显微观察研究,比较了其异同点。流苏石斛种子在培养基上萌发所需时间较长。黄花白芨种胚先变绿后突破种皮,主要从种子的一侧突破种皮,少数种子从种皮的一端突破种皮;独蒜兰的种胚发育有两种方式:大部分先变绿后突破种皮,少数突破种皮后变绿;种胚突破种皮主要从一端突破种皮,也有从一侧突破种皮的;流苏石斛种胚的发育方式和独蒜兰一样,但种胚从种皮的一端突破种皮。三种种子主要是通过原球茎途径分化成苗的。3.白芨微卫星引物开发本研究通过磁珠富集法开发白芨微卫星引物,利用克隆测序得到含有SSR的序列,根据SSR两端序列用Prime:Premie:5.0设计引物,在含有微卫星的序列中选取了13条设计引物。然后对这13条引物用TP-M13-SSR技术筛选出9对引物并检测其在34份供试的白芨样品(来自两个种群)和20份黄花白芨样品中的多态性情况。研究发现每个位点的等位基因数从1到12不等,其中位点BJ311、BJ120,只能在白芨扩增出特异条带;白芨的期望杂合度从0到0.7646,观测杂合度从0到0.950;黄花白芨的期望杂合度从0.296到0.871,观测杂合度从0.05到1。本研究结果表明,磁珠富集法所开发的9对微卫星引物对研究白芨属植物的种群遗传和进化历史很有帮助,这为制定出合理的保护策略提供了保证。这些引物能在黄花白芨基因组很好的扩增,体现了这些引物高的通用性,为同属其他物种的研究提供了帮助。