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矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)是植物中广泛存在的花色苷之一,进入体内会在肠道菌群的作用下去糖基化生成苷元矢车菊素(Cy)。C3G和Cy在生理条件下均不稳定,氧化产生原儿茶酸(PCA)和间苯三酚醛等降解产物。花青素体内的抗炎机理尚不明确,因此本论文比较研究了C3G和Cy抗鼠肠炎作用,比较研究了C3G、Cy和它们对应的氧化产物(OP-C3G、OP-Cy)及其中相应浓度的PCA对肠上皮屏障损伤的保护作用,以及它们对细胞氧化损伤的保护作用。
具体工作及结果如下:
1、通过三硝基苯磺酸(TNBS)诱导小鼠IBD模型,比较研究了C3G和Cy对鼠肠炎的保护作用,结果表明:C3G和Cy均可以减缓IBD模型小鼠体重下降趋势,降低DAI指数以及组织学评分,有效缓解了IBD小鼠的临床特征以及结肠组织损伤,剂量200μmol/kg的C3G和Cy显著抑制了IBD导致结肠组织中髓过氧化物酶(MPO)的过量产生以及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-γ的过度表达,从而发挥抗肠炎作用;相同浓度下的C3G与Cy的抗肠炎活性无显著差异(p>0.05)。
2、采用高效液相色谱-电喷雾质谱仪(HPLC-ESI/MS)技术,跟踪检测了C3G和Cy氧化过程中产物的变化,完全氧化后分别得到氧化混合物OP-C3G和OP-Cy,其中PCA产率分别为3.3%和10.0%,而间苯三酚醛的产率不到1.0%。
3、用人结肠癌Caco-2细胞模拟小肠屏障,通过LPS诱导小肠屏障炎症损伤,比较研究C3G、Cy以及OP-C3G、OP-Cy和其中对应浓度的PCA对小肠上皮屏障炎症损伤的保护作用,结果表明:C3G、Cy、OP-C3G、OP-Cy可抑制LPS诱导的细胞跨膜电阻值TEER的降低,减少荧光黄(LY)通量,保护肠上皮屏障的完整性,同时抑制NO和四种炎症因子的表达;高、中、低各浓度的C3G与其对应的OP-C3G、Cy与其对应的OP-Cy均无显著性差异(p>0.05)。而各氧化物中对应浓度的PCA均无显著抗炎性,说明C3G和Cy进入体内即使发生氧化,OP-C3G、OP-Cy仍具有抗炎活性,而其中发挥抗炎作用的可能并非是PCA,而是其中未知的氧化产物,或者氧化产物混合物的协同作用;高、中、低各浓度下的C3G和Cy的结果均无显著性差异(p>0.05)。
4、通过化学抗氧化性评价方法(FRAP、ABTS+?和ORAC)比较了C3G、Cy以及OP-C3G、OP-Cy和其中相应浓度PCA的抗氧化性,并以H2O2诱导Caco-2氧化应激模型,比较研究了它们对细胞氧化损伤的保护作用,结果发现:在化学抗氧化性评价方法中OP-C3G、OP-Cy仍具有较强抗氧化性;此外,C3G、Cy、OP-C3G、OP-Cy可提高Caco-2的谷胱甘肽水平(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶活(GPx)和锰-超氧化物歧化酶活(Mn-SOD),降低活性氧(ROS)水平,并抑制线粒体膜电位(MMP)的降低,减少caspase3蛋白的生成;相同浓度下的C3G与Cy的抗氧化能力、OP-C3G与OP-Cy的抗氧化性、C3G、Cy与其对应浓度的OP-C3G、OP-Cy抗氧化能力均无显著性差异(p>0.05)。
本研究旨在明确C3G和Cy对鼠结肠炎的保护作用,并通过细胞模型研究其抗炎、抗氧化作用机制,为临床应用花青素、作为潜在的预防或辅助治疗肠炎的药物提供理论依据,为深入了解花青素体内的生物可利用度的研究提供新的思路。
具体工作及结果如下:
1、通过三硝基苯磺酸(TNBS)诱导小鼠IBD模型,比较研究了C3G和Cy对鼠肠炎的保护作用,结果表明:C3G和Cy均可以减缓IBD模型小鼠体重下降趋势,降低DAI指数以及组织学评分,有效缓解了IBD小鼠的临床特征以及结肠组织损伤,剂量200μmol/kg的C3G和Cy显著抑制了IBD导致结肠组织中髓过氧化物酶(MPO)的过量产生以及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-γ的过度表达,从而发挥抗肠炎作用;相同浓度下的C3G与Cy的抗肠炎活性无显著差异(p>0.05)。
2、采用高效液相色谱-电喷雾质谱仪(HPLC-ESI/MS)技术,跟踪检测了C3G和Cy氧化过程中产物的变化,完全氧化后分别得到氧化混合物OP-C3G和OP-Cy,其中PCA产率分别为3.3%和10.0%,而间苯三酚醛的产率不到1.0%。
3、用人结肠癌Caco-2细胞模拟小肠屏障,通过LPS诱导小肠屏障炎症损伤,比较研究C3G、Cy以及OP-C3G、OP-Cy和其中对应浓度的PCA对小肠上皮屏障炎症损伤的保护作用,结果表明:C3G、Cy、OP-C3G、OP-Cy可抑制LPS诱导的细胞跨膜电阻值TEER的降低,减少荧光黄(LY)通量,保护肠上皮屏障的完整性,同时抑制NO和四种炎症因子的表达;高、中、低各浓度的C3G与其对应的OP-C3G、Cy与其对应的OP-Cy均无显著性差异(p>0.05)。而各氧化物中对应浓度的PCA均无显著抗炎性,说明C3G和Cy进入体内即使发生氧化,OP-C3G、OP-Cy仍具有抗炎活性,而其中发挥抗炎作用的可能并非是PCA,而是其中未知的氧化产物,或者氧化产物混合物的协同作用;高、中、低各浓度下的C3G和Cy的结果均无显著性差异(p>0.05)。
4、通过化学抗氧化性评价方法(FRAP、ABTS+?和ORAC)比较了C3G、Cy以及OP-C3G、OP-Cy和其中相应浓度PCA的抗氧化性,并以H2O2诱导Caco-2氧化应激模型,比较研究了它们对细胞氧化损伤的保护作用,结果发现:在化学抗氧化性评价方法中OP-C3G、OP-Cy仍具有较强抗氧化性;此外,C3G、Cy、OP-C3G、OP-Cy可提高Caco-2的谷胱甘肽水平(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶活(GPx)和锰-超氧化物歧化酶活(Mn-SOD),降低活性氧(ROS)水平,并抑制线粒体膜电位(MMP)的降低,减少caspase3蛋白的生成;相同浓度下的C3G与Cy的抗氧化能力、OP-C3G与OP-Cy的抗氧化性、C3G、Cy与其对应浓度的OP-C3G、OP-Cy抗氧化能力均无显著性差异(p>0.05)。
本研究旨在明确C3G和Cy对鼠结肠炎的保护作用,并通过细胞模型研究其抗炎、抗氧化作用机制,为临床应用花青素、作为潜在的预防或辅助治疗肠炎的药物提供理论依据,为深入了解花青素体内的生物可利用度的研究提供新的思路。