【摘 要】
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目的1.大量扩增PTB-30m重组质粒。2.评价DNA-85B和BCG序贯免疫能否诱导小鼠产生优于常规BCG免疫的抗结核免疫保护作用。方法1.将少量PTB-30m重组质粒转化入大肠杆菌DH5α中扩
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目的1.大量扩增PTB-30m重组质粒。2.评价DNA-85B和BCG序贯免疫能否诱导小鼠产生优于常规BCG免疫的抗结核免疫保护作用。方法1.将少量PTB-30m重组质粒转化入大肠杆菌DH5α中扩增;用含氨苄青霉素的LB培养基进行筛选;在含氨苄青霉素的LB液体培养基中扩大培养;用质粒抽提试剂盒抽提得到高纯度的PTB-30m重组质粒(通过紫外分光光度计测A260或A260/A280);最后用HindⅢ和EcoreⅠ作双酶切,1%琼脂糖凝胶电泳(电压170伏左右、时间约20分钟)。2.用PTB-30m重组质粒初次免疫C57BL/6小鼠,2周后用BCG加强免疫,分别于4周和8周后处死小鼠,制备脾淋巴细胞,用PPD刺激培养后分别用MTT法作淋巴细胞增殖转化试验;用ELISA试剂盒检测脾淋巴细胞培养上清中IL-2和IFN-γ含量;用流式细胞仪检测脾淋巴细胞表面CD25(IL-2Rα)的表达百分率。结果1.共获得高纯度PTB-30m重组质粒4856g,经双酶切后电泳有900bp左右片段存在,与Ag85B编码基因相符合。2.实验组(D-B
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