高压匀浆耦合双水相体系对胞内L-天冬酰胺酶释放提纯的研究

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qi_anwei1986
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L—天冬酰胺酶(EC 3.5.1.1)是治疗白血病的有效药物,普遍应用于临床。本文利用双水相系统耦合高压匀浆技术释放大肠杆菌细胞内L—天冬酰胺酶,将释放与纯化步骤相结合,并优化L—天冬酰胺酶释放率的操作条件。操作压力低于120 Mpa时,高压匀浆四次后,L—天冬酰胺酶活性丢失17.8%;添加三聚共嵌聚合物PEO-PPO-PEO可以提高L—天冬酰胺酶耐高压性;而加入KH2PO4和K2HPO4混合盐(KHP)加速酶的失活。与高压匀浆常规操作过程相比,在EOPO和KHP形成的双水相体系中,高压匀浆操作时L—天冬酰胺酶回收率大大提高。实验证明:高压匀浆破碎细胞率高,而双水相系统直接释放L—天冬酰胺酶不产生大量的细胞碎片,酶的释放率较高,结合两者优势,是一种有应用价值的释放胞内酶的方法。
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