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T4溶菌酶是目前发现活性最高的溶菌酶,可以同时裂解革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌,还可以通过一种非酶机制使病毒失活,抑制真菌游动孢子、分生孢子的萌发和菌丝的伸长,是一种高效的广谱抗菌剂。本研究克隆得到T4溶菌酶基因全长,并成功地将T4溶菌酶基因插入到表达载体pCambia1304中,得到含目的基因的表达载体pCT4。本研究首先建立了泡桐C125叶片的高效再生和农杆菌GV3101介导的遗传转化体系。所建立的再生体系中最佳的芽分化诱导培养基为:MS+12mg/L 6-BA+0.6 mg/L NAA,最佳生根培养基为:MS+2.5mg/L6-BA+0.1mg/L NAA+0.15 mg/L IBA。最佳的遗传转化体系为:农杆菌浓度为OD600 =0.2,侵染时间为3min,暗培养4天,最适脱菌剂Cef浓度为600mg/L,叶片对Hyg适宜的选择压力浓度为8mg/L。本研究以根癌农杆菌GV3101介导表达载体pCT4转化泡桐C125叶片,对经过筛选后的再生植株进行PCR扩增试验和GUS组织活性检测,得到了3株转基因植株,转化率为20%。以所得3株转基因植株无性系为砧木,泡桐丛枝病苗为接穗进行了嫁接转染实验,经过一个月培养后,观察到不同抗性程度和不同表型的嫁接苗。对嫁接苗进行植原体16SrRNA基因保守序列片段的PCR扩增试验,都检测到1.5kb大小的特异性条带,证明3个转基因植株无性系都嫁接成功。本研究以根癌农杆菌GV3101介导表达载体pCT4和阳性对照表达载体pCambia1304转化烟草、杨树和红豆杉愈伤组织TM3,转化和再生过程中均不使用抑制农杆菌的氨苄青霉素和筛选抗生素潮霉素B,结果表明:3个转化试验中阳性对照叶片或愈伤组织由于农杆菌的抑制作用,最后都黄化、褐化甚至死亡;3个转化试验中实验组(表达载体pCT4)的叶片在长满农杆菌的情况下都分化出再生芽,红豆杉愈伤组织TM3存在一定程度上的褐化现象,但与阳性对照相比较轻微。进一步将转化T4溶菌酶基因的烟草试验组分化的再生植株提取DNA,进行PCR扩增试验和GUS活性组织检测,得出转化率为11.7%;同时也提取转化后红豆杉愈伤组织TM3的基因组DNA,进行了PCR扩增和GUS活性组织检测,结果证明目的基因成功转入红豆杉愈伤组织TM3。综合表型差异和分子检测试验结果,初步认为T4溶菌酶基因可以作为一种新型的筛选标记基因。