论文部分内容阅读
本文对芥蓝（Brassica alboglabra Bailey）×青花菜（Brassica oleracea L．var．italica Planch）F1代衍生的双单倍体群体的分子图谱进行了初步构建，并以5个芥蓝品种（品系）为材料对构建作图群体（DH）的小孢子培养技术进行了研究。主要结果如下。 模板浓度影响到AFLP预扩增效果。模板DNA浓度10ng／μl-50ng／μl均有预扩增产物，但以30ng／μl的模板浓度进行预扩增所获得的条带比较整齐一致，浓度过高或过低扩增效果都不理想。 利用芥蓝和青花菜这两个甘蓝（Brassica oleracea L．）变种的双单倍体（DH）株系F1代所衍生的DH群体为作图群体，基于稳定的AFLP和Li-cor荧光检测体系，从96对3个选择性碱基的EcoR／MsI引物组合中筛选出46对稳定、重复性高、多态性好的引物组合。 利用入选引物对DH群体及双亲进行AFLP标记多态性分析，共获得421个清晰度高、重复性好的多态性标记，平均每对引物产生9.2个多态性AFLP标记。利用作图软件JoinMap 3.0进行连锁关系分析，排除缺失数据过多的单株和分离不理想的位点，构建了一个长度为801.5cM，包括327个AFLP标记的遗传连锁图。该图谱包括9个主连锁群和2个小连锁群，最大图距14cM，最小为0cM，平均标记间距3.6cM。AFLP分子标记在连锁图上分布不是十分均匀，AFLP标记以标记串（clustering）形式分布在连锁群的中间或两头。连锁图的另一个重要特征是零图距标记多，最多一个位点有10个标记。 在对芥蓝小孢子培养再生植株的研究中，发现胚状体的发生存在基因型间差异，在试验所及的5个基因型中，只有3个基因型观察到小孢子的细胞分裂，但仅1个基因型（A99）有胚状体发生，并获得了562个胚状体。研究还发现，60转／min、25℃的摇床振荡培养可以明显促进胚状体的发育，子叶期胚状体的发生频率最高可达67.41％，是静置培养条件下的3倍。将子叶期胚状体转移到MS和B5培养基中，均获得了再生植株，培养基种类对植株再生无明显影响。