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文献报道多种含有三氮唑结构的化合物具有潜在的抗癌活性,能够抑制细胞增殖,阻滞肿瘤细胞周期进程,干扰微管的运动,抑制微管聚合,诱导肿瘤细胞凋亡及终末分化,这些作用已引起国内外药物研究和开发领域的高度重视。本课题以人肝癌细胞株BEL-7402为研究对象,利用胡国强博士设计并合成的系列三氮唑衍生物进行药物筛选和作用机制的初步探讨。为在肿瘤治疗领域开发应用该类化合物提供一定的实验依据。目的:通过对21种三氮唑席夫碱衍生物的初步筛查,寻找对BEL-7402细胞增殖有显著抑制作用的化合物,进一步对其作用机制进行初步研究,为该类化合物的进一步开发利用提供依据。方法:MTT法进行药物初步筛查;流式细胞术PI单色标记法检测细胞周期的改变;流式细胞术FITC-AnnexinⅤ/PI双色标记法检测细胞凋亡情况;荧光显微技术Hoechst33258染色观察凋亡细胞形态学变化;免疫细胞化学方法检测细胞内激活型Caspase-3蛋白表达情况;Western-blotting检测细胞凋亡相关蛋白表达的变化;RT-PCR法检测细胞分化相关基因表达的改变;放射免疫法检测细胞分化相关蛋白水平变化;酶学方法检测细胞内过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及碱性磷酸酶(ALP)活性改变。结果:MTT法测21种化合物对肝癌细胞株BEL-7402细胞增殖的作用。发现LH-36, LH-37, LH-38, LH-39四种化合物具有显著的细胞增殖抑制作用。其中LH-37, LH-38在0.1μmol/L~100μmol/L的浓度范围内能显著抑制肝癌细胞增殖而且呈浓度、时间依赖关系。作用于细胞48 h的IC50值低,分别是302.7μmol/L,4.61μmol/L;细胞周期阻滞在G1/S期。0.1μmol/L~100μmol/L的浓度范围内LH-37, LH-38作用BEL-7402细胞48 h,凋亡细胞数量显著增加。Caspase-3,Caspase-9, P53蛋白表达量高于正常培养组,Bcl-2蛋白表达量不变。激活型Caspase-3表达阳性细胞数高于对照组。细胞甲胎蛋白(α-FP)mRNA表达量明显降低,白蛋白(Alb)mRNA表达量增高,α-FP蛋白分泌量降低,Alb蛋白分泌量增高。细胞内过氧化氢酶活性降低,超氧化物歧化酶及碱性磷酸酶活性均增高。结论:1. LH-37, LH-38具有抑制肝癌细胞增殖,阻滞细胞周期进程作用,LH-38抑制作用呈浓度和时间依赖性。2. LH-37, LH-38在IC50值浓度有诱导BEL-7402细胞凋亡作用。3. LH-37, LH-38低于IC50值浓度具有一定的诱导BEL-7402细胞分化作用4. LH-37, LH-38诱导细胞凋亡、细胞分化作用可能与抑制细胞内过氧化氢酶活性,增加细胞内超氧化物歧化酶活性,提高细胞内H2O2含量,导致细胞氧化损伤有关。