第一部分RACK1在胃癌组织中的表达和临床意义研究目的：胃癌是严重危害人类生命健康的一类恶性肿瘤,目前仍是全球范围内癌症相关的第二大死因。胃癌的侵袭和转移始终是影响胃癌疗效进一步改善的重要因素。蛋白激酶1活化受体(RACK1)是一个参与诸多细胞内信号传导通路的构架蛋白,在多种肿瘤中的表达和意义已有报道。本研究旨在探讨RACK1在胃癌中的表达和和临床意义。研究方法：收集在复旦大学附属中山医院普外科接受手术治疗的胃癌患者癌和癌旁正常组织,及其临床病理资料。其中,84例(2000年2月17日至2005年12月9日)用于构建组织芯片,采用免疫组织化学法检测RACK1蛋白的表达情况；15例(2011年3月21日至4月8日)采用免疫印迹法检测RACK1蛋白的表达情况。将RACK1蛋白的表达情况与患者的临床病理资料进行相关性分析,采用Kaplan-Meier法分析5年生存率,Cox回归进行多因素分析。研究结果：免疫印迹法检测表明,RACK1在胃癌组织和癌旁正常组织中均有表达,而且癌组织中的表达低于癌旁正常组织。免疫组织化学检测表明,RACK1在胃癌组织中51例(60.7%)为低表达,33例(39.3%)为高表达。RACK1在胃癌组织中的低表达与Lauren’s分型(弥漫型)、分化程度(低分化)、肿瘤浸润深度(T3-T4)、淋巴结转移(N1-N3)和TNM分期(Ⅲ～Ⅳ)具有统计学相关性(P<0.05)。RACK1高表达组的5年生存率明显优于低表达组(P=0.022)；对于T2-T4患者而言,RACK1高表达组的5年生存率同样明显优于低表达组(P=0.014)。多因素分析表明,淋巴结转移和远隔转移是胃癌患者术后生存的独立影响因素,而RACK1的表达水平不是独立影响因素。研究结论：RACK1在胃癌组织中表达降低,并与不良预后因素和不佳的5年生存期相关,提示RACK1可能参与了对胃癌发生发展的调控。第二部分RACK1通过抑制IL-8自分泌调节胃癌细胞的侵袭研究目的：肿瘤微环境对于肿瘤发生发展具有重要影响。趋化因子白细胞介素8(IL-8)是肿瘤微环境中的一个重要调节因子,肿瘤细胞可以产生IL-8,以自分泌或旁分泌方式促进其增殖、血管新生,甚至侵袭和转移。本研究旨在探讨细胞构架蛋白RACK1对胃癌细胞IL-8表达的调控和对侵袭性的影响。研究方法：选取人胃癌HGC-27和MGC80-3细胞系,应用RNA干扰技术(shRNA)建立RACK1基因沉默细胞株,并收集不同细胞的条件培养基。通过实时定量PCR和蛋白印迹法检测特定分子转录水平和蛋白水平的变化。通过酶联免疫吸附试验检测细胞上清IL-8的水平。通过细胞迁移实验(细胞划痕实验)和细胞侵袭实验(Transwell实验)观察细胞迁移和侵袭能力的改变。通过细胞因子抗体芯片检测细胞上清细胞因子的变化。通过抗体中和试验检测特定分子对细胞侵袭能力的影响。通过特异性抑制剂检测特定信号通路对IL-8产生的影响。通过非参数Spearman’s p检验分析胃癌组织中RACK1和IL-8表达的相关性。研究结果：(1) RACK1基因沉默后,胃癌细胞的迁移和侵袭能力均有显著增强。来自RACK1基因沉默细胞的条件培养基可以显著增强父代细胞的迁移和侵袭能力；(2)在细胞上清中,RACK1基因沉默细胞的IL-8表达显著升高。IL-8中和抗体显著抑制细胞的侵袭能力。提示胃癌细胞的RACK1下调后,通过上调IL-8增强侵袭能力；(3)NF-κB和c-Src特异性抑制剂(PDTC和PP2)可以显著抑制IL-8的分泌。细胞过表达Src-显性负突变体或经PP2处理后,IκBa的表达水平上调,核蛋白中NF-κB的P65亚基则显著下调。提示Src/NF-κB信号通路可能参与RACK1对IL-8的表达调控；(4)IL-8受体CXCR1在MGC80-3细胞中高表达,CXCR2在HGC-27细胞中高表达。CXCR2中和抗体可抑制细胞的侵袭能力,提示IL-8/CXCR2轴可能参与调控胃癌的侵袭；(5)胃癌组织中RACK1和IL-8的表达呈负相关性(r=-0.514,P=0.000)；(6)某些NF-κB抑制剂可快速诱导细胞凋亡和S期阻滞,具有较强的抗肿瘤作用。研究结论：RACK1通过抑制Src/NF-KB信号通路,从而抑制IL-8的自分泌,对胃癌细胞的侵袭和转移起到负调节作用。