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姬松茸多糖具有提高机体免疫力、降血糖、抗肿瘤生长、抗氧化、抗辐射、抗突变等多种生物活性,研究发现,多糖的活性与它本身的分子结构有着密切关系,通过化学修饰的方法可以提高多糖溶解性,增强多糖本身的生物活性。本研究探索了姬松茸多糖磷酸化的工艺方法以及磷酸化多糖的药理作用,为进一步开发新产品奠定理论基础。(1)利用大孔树脂吸附法对姬松茸多糖进行纯化,并通过单因素试验观察物料比、磷酸化试剂配比、温度、时间和pH值对姬松茸多糖磷酸根接枝量的影响,进而通过正交试验设计法得出姬松茸多糖磷酸化的最适条件。结果表明,多糖与磷酸化试剂物料比为1:3,STPP与STMP比例为6:1,温度95℃,时间5.5h,pH值为9,此时磷酸根接枝量为9.35%,为姬松茸多糖磷酸化的最佳反应条件。(2)利用腹腔注射法对小鼠进行磷酸化姬松茸多糖的急性毒性试验。安全剂量范围测定中,给药量范围0.25g/kg至5g/kg小鼠存活率均为100%。最大给药量试验中,给药剂量分别为5g/kg、10g/kg和15g/kg,通过组织学检查和血液生化指标检测,所有试验组小鼠与对照组小鼠均无显著差异。证明磷酸化姬松茸多糖对小鼠是无毒害的。(3)用磷酸化姬松茸多糖和姬松茸多糖进行了对比试验,测试两种多糖对大肠杆菌、沙门氏菌、双球菌、链球菌这四种细菌的抑菌效果。结果显示两者对大肠杆菌和沙门氏菌均有抑菌作用,且磷酸化姬松茸多糖抑菌效果较好。(4)三组小鼠分别灌服磷酸化姬松茸多糖、姬松茸多糖和生理盐水。结果显示磷酸化姬松茸多糖组的小鼠体重和免疫器官重量增长较快,显著高于姬松茸多糖组和对照组。三组小鼠的各器官均正常良好,无显著性差异。同上处理的三组小鼠灌服大肠杆菌,灌服13 d后眼球采血测定血清抗体(IgG)含量,处死后取三组小鼠脾脏,通过RT-PCR对小鼠脾脏中IL-2、IL-4、INF-γ表达水平进行测定。结果显示,一免后磷酸化姬松茸多糖组的抗体(IgG)含量显著高于生理盐水对照组;二免后磷酸化姬松茸多糖的抗体含量显著高于另两组。一免后三组小鼠的基因表达水平无显著性差异,而二免后两个多糖组小鼠的基因表达水平与对照组相比均有显著性差异,二次免疫的免疫效果优于一次免疫。结果说明姬松茸多糖磷酸化前后均可以显著提高二免小鼠血清抗体水平,均可以显著提升二免小鼠脾脏中IL-2、IL-4、INF-γ的表达,且均为磷酸化姬松茸多糖效果较好。