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目的： 急性肾损伤（AKI，Acute kidney injury）是全球范围内广泛出现的一种肾脏疾病，引起肾脏功能突然丧失，致死率高。目前临床肾损伤中发现，随着不良生活习惯，环境污染以及药物的滥用，肾损伤事件逐年增多，其中婴幼儿肾损伤发病率越来越高，其分子发病机制不详。本研究，利用幼龄鼠叶酸（FA，Folic acid）-AKI小鼠模型，探讨肾损伤程度是否与年龄相关，且探讨其发病机制。目前婴幼儿急性肾损伤的治疗方法不多，干细胞治疗急性肾损伤是研究热点。因此通过小鼠骨髓间充质干细胞（MSCs，Mesenchymal stem cells）治疗幼龄鼠AKI模型小鼠，探索其治疗作用及新的作用机制。所有这些研究有助于揭示婴幼儿急性肾损伤新的发病机制，同时为骨髓间充质干细胞临床应用提供新的理论依据。 第一部分方法： 建立FA诱导AKI小鼠模型，观察FA对4周幼龄鼠和8周成年小鼠的肾脏损伤情况。在第一天和第二天，通过检测肾损伤指标（血浆中Cr和BUN水平、肾/体重比值，HE染色观察肾小管病变），并进一步探讨发病机制：炎症因子（IL17）观察FA对4周幼龄鼠和8周成年小鼠的损伤。同时通过免疫组织化学和蛋白印迹方法检测肾脏血管生长因子（Ang-1、Ang-2），肾小管保护因子（SIRT1），肾小管上皮细胞自噬因子（Beclin1、LC3）。 第二部分方法： 在第一部分基础上，为探索MSCs对4周FA-AKI幼龄小鼠的治疗作用，通过注射 MSCs后，在第一天和第二天，检测小鼠肾损伤指标（血浆中Cr和BUN水平、肾/体重比值，HE染色观察肾小管病变）观察其治疗效应。探讨其疗效新的分子作用机制:检测FA-AKI经MSCs治疗后炎症因子（IL17），肾脏血管生长因子（Ang-1、Ang-2），肾小管保护因子（SIRT1），肾小管上皮细胞自噬因子（LC3、Beclin1）一系列相关因子及自噬体变化。 第一部分结果： 通过FA诱导4周幼龄和8周成年小鼠急性肾损伤，发现在叶酸诱导AKI第二天，4周龄幼小鼠的 Cr水平（117.81±1.22μM/L）比8周成年小鼠（77.75±6.15μM/L）明显升高，p﹤0.05，有统计学意义。BUN水平（92±0.83 mM/L）比8周成年小鼠（56.7±8.81 mM/L）明显升高，p﹤0.05，有统计学意义。 在叶酸诱导AKI第二天，肾体重比值（1.42±0.02%）比8周成年小鼠（1.16±0.05%）明显升高，p﹤0.05，有统计学意义。肾小管腔相对面积比值（5.03±0.93）比8周成年小鼠（2.38±0.78）明显升高，p﹤0.05，有统计学意义。 在叶酸诱导 AKI第二天，炎症因子 IL17变化倍数(6.56±0.93)比8周成年小鼠（2.38±0.78）明显升高，p﹤0.01，有统计学意义。 蛋白印迹结果显示： 在叶酸诱导AKI第二天，4周幼龄小鼠Ang-1/Ang-2（0.57±0.07）比8周成年小鼠（2.26±0.07）明显降低，p﹤0.01，有统计学意义；SIRT1（2.19±0.05）比8周成年小鼠（4.03±0.12）明显降低，p﹤0.01，有统计学意义；Beclin1（2.82±0.19）比8周成年小鼠（4.24±0.16）明显降低，p﹤0.01，有统计学意义。 免疫组织化学结果显示： 在叶酸诱导AKI第二天，4周幼龄小鼠的LC3阳性细胞百分数（23.57±2.68%）比8周小鼠（34.80±0.86%）明显降低，p﹤0.05，有统计学意义；Ang-1阳性细胞百分数（20.56±0.89%）比8周小鼠（36.71±1.49%）明显降低，p﹤0.05，有统计学意义；Ang-2阳性细胞百分数（46.36±1.19%）比8周小鼠（34.66±1.19%）明显升高，p﹤0.05，有统计学意义。 第二部分结果： MSCs治疗后，BUN水平在第一天干细胞组（50.45±4.44mM/L）比生理盐水组（65.54±2.62 mM/L）明显降低，p﹤0.01，有统计学意义；在第二天（62.41±3.20 mM/L）比生理盐水组（79.62±2.49 mM/L）明显降低，p﹤0.01，有统计学意义。 Cr水平在第一天干细胞组（76.51±4.39μM/L）比生理盐水组（125.43±2.91μM/L）明显降低，p﹤0.01，有统计学意义；在第二天（105.28±2.91μM/L）比生理盐水组（148.60±10.29μM/L）明显降低，p﹤0.05，有统计学意义。 肾体重比值在第一天干细胞组（1.12±0.05%）比生理盐水组（1.40±0.05%）明显降低，p﹤0.05，有统计学意义；在第二天（1.14±0.02%）比生理盐水组（1.62±0.11%）明显降低，p﹤0.05，有统计学意义。 肾小管腔相对面积比值在第一天干细胞组（1.81±0.39）比生理盐水组（3.93±0.85）明显降低，p﹤0.05，有统计学意义；在第二天（2.72±0.50）比生理盐水组（5.74±1.17）明显降低，p﹤0.05，有统计学意义。 IL17在第一天干细胞组（30.82±0.74 pM/L）比生理盐水组（40.72±0.67pM/L）明显降低，p﹤0.01，有统计学意义；在第二天（50.50±0.78 pM/L）比生理盐水组（57.70±0.82 pM/L）明显降低，p﹤0.01，有统计学意义。 蛋白印迹结果： Ang-1/Ang-2在第一天干细胞组（3.56±0.64）比生理盐水组（0.56±0.04）明显升高，p﹤0.05，有统计学意义；在第二天（3.08±0.53）比生理盐水组（0.54±0.02）明显升高，p﹤0.05，有统计学意义。 SIRT1在第一天干细胞组(3.39±0.15)比生理盐水组(2.28±0.20)明显升高，p﹤0.05，有统计学意义；在第二天(3.21±0.09)比生理盐水组(1.78±0.36)明显升高，p﹤0.05，有统计学意义。 Beclin1在第一天干细胞组(3.50±0.19)比生理盐水组(2.09±0.11)升高，p﹤0.05，有统计学意义；在第二天(3.46±0.07)比生理盐水组(1.78±0.16)升高，p﹤0.05，有统计学意义。 免疫组织化学结果： Ang-1阳性细胞百分数在第一天干细胞组（52.38±1.20%）比生理盐水组（25.83±1.59%）明显升高，p﹤0.01，有统计学意义；在第二天（33.28±1.11%）比生理盐水组（21.91±0.88%）明显升高，p﹤0.01，有统计学意义。 Ang-2阳性细胞百分数在第一天干细胞组（31.54±1.57%）比生理盐水组（60.10±1.19%）明显降低，p﹤0.01，有统计学意义；在第二天（42.01±1.08%）比生理盐水组（74.86±2.11%）明显降低，p﹤0.01，有统计学意义。 LC3阳性细胞百分数在第一天干细胞组（58.50±1.20%）比生理盐水组（50.89±1.21%）明显升高，p﹤0.01，有统计学意义；在第二天（35.78±1.11%）比生理盐水组（26.12±0.99%）明显升高，p﹤0.01，有统计学意义。 结论： 1、FA诱导AKI小鼠模型中，4周幼龄AKI小鼠肾脏损伤明显比8周龄重，可能与肾脏血管生长因子Ang1/Ang2失衡，炎症因子IL17升高，自噬因子LC3和Beclin1以及肾小管保护因子SIRT1降低有关，为婴幼儿易患AKI提供新的分子发病机制。 2、经MSCs治疗后，肾功能和病理损伤减轻，可能是通过维持血管内皮细胞稳定，增强肾小管保护因子的表达，抑制炎症因子释放以及激活自噬等行使保护作用，为间充质干细胞治疗临床AKI提供新的理论基础。