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背景作为人类常见的消化系统疾病之一,是一种由多种因素引起,病因尚不明确的慢性非特异性炎症性肠病,目前导致溃疡性结肠炎的因素包括:肠道菌群失调、适应性免疫失常、环境和遗传等。溃疡性结肠炎反复迁延不愈在影响患者身体健康以及生活质量的同时,由于其反复发作导致溃疡性结肠炎相关性结直肠癌占溃疡性结肠炎患者死亡的9%-11%,因此溃疡性结肠炎被世界卫生组织列为现代难治病之一。人体肠道菌群的数量、组成和分布与肠道相关疾病以及相关代谢性疾病相互影响,密不可分。溃疡性结肠炎患者肠道菌群可发生紊乱,而肠道菌群的数量和结构也可以反过来作用于肠道,进一步影响肠道内正常功能的发挥。近年来,越来越多的研究利用分子生物学的方法探讨了溃疡性结肠炎患者肠道菌群的组成结构变化特点,而更进一步有关溃疡性结肠炎中医证候与肠道菌群特点的研究相对较少。本文采用16S rDNA高通量测序技术及生物信息学分析方法,对活动期溃疡性结肠炎寒热错杂证寒热偏盛的不同以及与正常人之间肠道菌群结构的差异和特征进行了分析。研究目的比较和分析活动期溃疡性结肠炎寒热错杂证寒热偏盛不同的患者以及健康人群肠道菌群组成和结构的差异,初步探讨活动期溃疡性结肠炎患者与健康人群肠道菌群组成和结构变化的关系,以及寒热错证患者不同寒热偏盛之间肠道菌群组成和结构变化的关系。研究方法实验一:本研究收集2017年10月至2018年2月北京中医药大学东方医院脾胃肝胆科门诊及住院活动期溃疡性结肠炎患者14人,以及健康对照组14人,收集患者粪便标本,提取其肠道菌群总DNA,采用高通量测序技术对16S rDNAV3-V4可变区测序,并进行生物信息分析(肠道菌群物种的分类、丰度分析及多样性分析),得出活动期溃疡性结肠炎患者与正常人之间的菌群差异。实验二:本研究收集2018年3月至2018年12月北京中医药大学东方医院脾胃肝胆科门诊及住院活动期溃疡性结肠炎患者39例,其中19例偏寒证患者和20例偏热证患者,收集患者粪便标本,提取其肠道菌群总DNA,采用高通量测序技术对16S rDNA V3-V4可变区测序,并进行生物信息分析(肠道菌群物种的分类、丰度分析及多样性分析),得出活动期溃疡性结肠炎寒热错杂证寒热偏盛不同之间的菌群差异。结果:实验一:(1)活动期溃疡性结肠炎患者与健康人群的菌群在丰度、多样性以及结构均存在显著性差异(P<0.05);(2)在门的水平上活动期溃疡性结肠炎患者的拟杆菌门(Bacteroidetes)和厚壁菌门(Firmicutes)相关菌属均低于健康人,但是变形菌门(Proteobacteria)和疣微菌门(Verrucomicrobia)的比例高于健康人;(3)在属水平上健康人群中以拟杆菌属Bacteroides(拟杆菌属),Roseburia(罗斯氏菌属),lachnospira(毛螺菌属),Prevotella 9(普雷沃菌属)等为主;溃疡性结肠炎患者以Akkermansia(艾克曼菌属),Bifidobacterium(双歧杆菌属);Lactobacillus(乳酸菌属),Escherichia-Shigella(埃希氏菌-志贺氏菌属)等菌属等为主。实验二:(1)活动期溃疡性结肠炎寒热错杂证患者寒热不同偏盛两组之间在菌群丰度及多样性上无显著差异(P>0.05);但在部分菌种所占比例相比有显著差异(P<0.05);(2)门水平上的差异偏寒组可能以变形菌门所占比例导致,偏热组可能以拟杆菌门所占比例引起;属水平上的差异偏寒组可能以Escherichia-Shigella(埃希氏-志贺氏菌属)所占比例为主,偏热组可能以Bacteroidales(拟杆菌目)所占比例为主;(3)寒热错杂证偏热组患者肠道中以Bacteroidetes(拟杆菌门),Bacteroidia(拟杆菌纲),Bacteroidales(拟杆菌目),Eisenbergiella(艾森伯吉氏菌科),Hungatella,为主;偏寒组以Proteobacteria(变形菌门),Gammaproteobacteria(变形菌纲),Enterobacteriales(肠杆菌目),Enterobacteriaceae(肠杆菌科),Escherichia-Shigella(埃希氏菌-志贺氏菌属);Actinobacteria(放线菌门),Actinobacteria(放线菌纲),Bifidobacteriales(双歧杆菌目),Bifidobacteriaceae(双歧杆菌科),Bifidobacterium(双歧杆菌属);Verrucomicrobia(疣微菌门),Verrucomicrobiae(疣微菌纲),Verrucomicrobiales(疣微菌目),Verrucomicrobiaceae(疣微菌科),Akkermansia(艾克曼菌属)等为主。结论:(1)活动期溃疡性结肠炎患者与健康对照组相比,肠道菌群的丰度、多样性及结构之间均存在差异(P<0.05);在活动期溃疡性结肠炎患者肠道中主要表现为Bifidobacterium(双歧杆菌属)为代表的 Actinobacteria(放线菌门),Akkermansia(艾克曼菌属)为代表的Verrucomicrobia(疣微菌门)以及Escherichia-Shigella(埃希氏菌-志贺氏菌属)等菌属的富集为主;在健康对照组中主要表现为以lachnospira(毛螺菌属)为代表的Firmicutes(厚壁菌门)和Prevotella(普雷沃菌属)为代表的Bacteroidetes(拟杆菌门)等相关菌属富集为主;(2)活动期溃疡性结肠炎寒热错杂证患者寒热不同偏盛两组之间在菌群丰度以及多样性上无显著差异(P>0.05);但在部分菌种所占比例相比有显著差异(P<0.05)。肠道菌群门水平和属(目)水平存在差异性:门水平上的差异偏寒组可能以Proteobacteria(变形菌门)所占比例为主,偏热组可能以Bacteroidetes(拟杆菌门)所占比例为主;属水平上的差异偏寒组可能以Escherichia-Shigella(埃希氏-志贺氏菌属)所占比例为主,偏热组可能以Bacteroidales(拟杆菌目)所占比例为主。(3)活动期溃疡性结肠炎寒热错杂证之寒热不同偏盛之间可能存在代表寒热不同偏盛的菌种:偏寒组代表性菌属为隶属于变形菌门的Escherichia-Shigella(埃希氏-志贺氏菌属),偏热组代表性菌属为拟杆菌门的Bacteroidales(拟杆菌目)。