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新孢子虫（Neospora caninum）是引起犬运动机能障碍，牛流产等症状的细胞内寄生的原生寄生虫，而且宿主范围较广，促进了新孢子虫的传播感染，给畜牧业带来巨大的经济损失，现在还没有证明新孢子虫可以感染人，但是有研究表明在人血清中也检测到了新孢子虫的抗体，而且新孢子虫在体外培养可以侵入多种人源的细胞，所以不能忽视。但是，目前为止还没有研制出治疗新孢子虫病的特效药物和有效疫苗，现在防治的有效办法是通过检测后确定新孢子虫感染的牛，然后淘汰、处理，建立无新孢子虫感染牛群。准确诊断是有效控制新孢子虫病发生和传播的重要手段，所以对新孢子虫病诊断方法的深入研究和流行病学调查就显得极其重要。本试验建立了新孢子虫巢式PCR检测方法，利用该方法对长春地区的犬、鸽子进行了新孢子虫的检测，主要包括以下几部分：1.本试验根据新孢子虫特异NcP40基因（编号NCLIV034390）设计巢式PCR引物，建立新孢子虫巢式PCR检测方法并优化其反应的条件，确定了反应的最佳退火温度为56℃，镁离子浓度1.5mmol/L，具有很高的特异性和灵敏性，可以检测到一个虫体的基因，并且不与刚地弓形虫（Toxoplasma gondii），犬哈氏哈德蒙虫（Hammondia heydorni）和犬等孢球虫（Isospora canis）等有交叉反应。2.本试验利用建立的巢式PCR检测方法对长春地区鸽子脑组织和犬粪便样品进行检测。共检测鸽子脑组织样品210个，阳性样品63个，感染率为30%，ITS1序列分析结果表明鸽子感染的新孢子虫有5个基因型，其中40个与NC-PR一致，10个与NC-1一致，其余三种为尚未报道的新基因型。犬粪便样品共检测120个，阳性样品50个，阳性率为41.7%，犬感染的新孢子虫有4个基因型，28个与NC-PR一致，13个与NC-1一致，其余两种为新孢子虫的新基因型。新基因型都是由NC-PR进化而来的。本试验建立了新孢子虫特异基因巢式PCR的检测方法，根据建立的巢式PCR方法检测了长春地区鸽脑组织、犬粪便中新孢子虫DNA。本试验建立的巢式PCR检测方法可用于新孢子虫病诊断和流行病学调查，为我国该病的诊断、流行病学和检疫等提供方法手段，并获得了长春地区新孢子虫病的流行病学资料。