刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种专性细胞内寄生的顶复门原虫,感染范围极广,世界上约有三分之一的人口感染弓形虫,呈现世界性大流行趋势。弓形虫感染免疫功能低下的宿主时,可导致脑炎、淋巴结肿大、视网膜炎和心肌炎等症状,是一种重要的人畜共患病原体。弓形虫病的流行与传播严重威胁人类健康和公共卫生安全。目前治疗弓形虫病的“金标准”用药是乙胺嘧啶和磺胺嘧啶。但乙胺嘧啶和磺胺嘧啶药物具有较强的毒副作用,可导致宿主出现恶心、呕吐等症状,严重时会造成宿主肝功能异常,长期使用会产生耐药性。因此,探寻新的高效且低毒副作用的药物用来防治弓形虫病迫在眉睫。奥巴托克（Obatoclax,也称为GX15-070）是一种治疗血液系统恶性肿瘤的新型抗癌药物,还可用于治疗冠状病毒及寄生虫感染,特别是对恶性疟原虫和微小隐孢子虫等顶复门原虫的生长发育具有明显的抑制作用。顶复门原虫具有相似的生长发育周期及致病机制,因此奥巴托克可能是潜在的治疗弓形虫病的药物。同时奥巴托克具有毒副作用小、不易产生耐药性等优点。因此本研究通过体内体外实验探究奥巴托克对弓形虫病的治疗作用,探究药物作用机制,为奥巴托克作为治疗弓形虫病的潜在药物提供理论依据。本研究首先用CCK-8细胞活性试剂盒筛选奥巴托克作用于Vero细胞的安全浓度为0-100 n M。通过CCK-8细胞活性检测和Giemsa染色方法评估奥巴托克抗弓形虫速殖子入侵细胞的能力。弓形虫以5:1的比例感染细胞后,使用不同浓度的奥巴托克孵育细胞,结果表明与对照组相比,奥巴托克可以显著抑制弓形虫入侵细胞且呈剂量依赖性。使用CCK-8细胞活性检测、Giemsa染色和荧光定量PCR三种方法探究药物抗弓形虫在细胞内增殖的能力。结果表明,相较于弓形虫感染对照组,用药组细胞活性显著提高,细胞内虫体数量和虫体负荷量显著减少,证明奥巴托克可以显著抑制弓形虫增殖,且呈现剂量依赖性。建立弓形虫急性感染小鼠模型,探究奥巴托克对感染弓形虫小鼠的治疗效果。结果表明,奥巴托克显著提高感染小鼠的存活率,q PCR检测结果表明相较于弓形虫感染对照组,药物治疗组小鼠心脏,肝脏,脾脏和肾脏中虫体负荷量显著减少,且呈现剂量依赖性,感染小鼠肝脾组织病理切片结果显示奥巴托克可以有效减少弓形虫感染引起的组织学病变。体内体外实验结果共同证明奥巴托克可以有效抑制弓形虫感染。为了探究奥巴托克抗弓形虫感染的作用机制,利用透射电子显微镜（TEM）观察药物对弓形虫速殖子超微结构的影响,ROS检测试剂盒检测经药物孵育后速殖子内ROS水平,同时测定药物孵育后速殖子线粒体膜电位（ΔΨm）以及ATP的产生水平。结果表明,奥巴托克破坏了弓形虫速殖子线粒体结构,诱导其ROS产生增多,降低了弓形虫速殖子线粒体膜电位和ATP水平,证明奥巴托克可能通过破坏弓形虫速殖子氧化还原平衡诱导虫体死亡。研究证明多种药物通过调控宿主细胞自噬和凋亡机制,发挥抗弓形虫作用。因此,本研究通过检测自噬和凋亡的关键因子评估奥巴托克对宿主细胞自噬和凋亡的调控作用。结果显示弓形虫感染Vero细胞4 h时,自噬相关蛋白m RNA水平显著上升,自噬相关蛋白表达水平上升,LC3 II/LC3 I比例显著上升,当弓形虫感染时间延长,特别是感染24 h时自噬水平相较于感染4 h时显著下降。证明弓形虫感染4 h时可以显著诱导宿主细胞自噬发生,弓形虫感染后期在适应细胞内环境后可能会调节细胞内自噬清除。奥巴托克治疗弓形虫感染实验结果表明,相较于弓形虫感染对照组,奥巴托克可以显著上调自噬相关蛋白的表达,在24 h时维持细胞较高自噬水平。证明奥巴托克可以通过增强细胞自噬来发挥抗弓形虫作用。细胞凋亡是抵御细胞内病原体感染的重要防御机制之一,利用WB和AO/EB实验检测细胞凋亡关键蛋白及凋亡细胞数量,评估奥巴托克对凋亡的调控作用。结果表明,弓形虫感染可以显著促进CASP3和PARP蛋白剪切,增加凋亡细胞数量,证明弓形虫感染能引起细胞凋亡。奥巴托克治疗弓形虫感染实验结果表明,相较于弓形虫感染组,奥巴托克显著降低CASP3和PARP剪切水平,凋亡细胞数量显著减少,证明奥巴托克可以缓解弓形虫感染引起的细胞凋亡。本研究首次证明了奥巴托克以剂量依赖性的方式抑制弓形虫对宿主细胞的入侵和增殖,且具有较高的治疗指数。奥巴托克可缓解因弓形虫感染引起的小鼠肝脏脾脏组织病变,显著降低小鼠各组织中的弓形虫负荷量,提高小鼠存活率。奥巴托克可增加速殖子ROS产生,降低ΔΨm和ATP水平,破坏线粒体结构,从而破坏速殖子的氧化-抗氧化稳态,进而导致氧化应激,抑制弓形虫速殖子的生长。此外奥巴托克还通过增强宿主细胞的自噬水平,缓解感染细胞的凋亡水平以达到对弓形虫感染的间接抑制作用。本研究揭示了奥巴托克可以作为抗弓形虫感染的潜在候选化合物,为研制新型抗弓形虫药物提供了理论依据。