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目的: 通过建立茎环结构逆转录引物SYBR Green1实时定量RT-PCR法检测大鼠心肺复苏(CPR)后心肌损伤相关微小核糖核酸(microRNA,miRNA)的表达水平,初步探讨心肌损伤相关miRNA在CPR后不同时间表达差异。 方法: 成年雄性Sprague-Dauley(SD)大鼠64只,随机分为假手术对照组(A组)、复苏组(B组),A组按插管后或B组按自主循环恢复(ROSC)后(B组)3小时、6小时、12小时、24小时各分为4个亚组(即A3、A6、A12、A24,B3、B6、B12、B24组,n=8)。B组采用窒息致心博骤停(CA)方法建立大鼠CPR模型,A组仅施行麻醉,气管切开,血管穿刺等操作,不窒息及复苏。各组于相应时间点取材取左心室心肌标本置在-80℃冰箱保存,用于提取总RNA,以通过茎环结构的SYBR Green1荧光定量PCR(RT-PCR SYBR Green1)检测miRNA的表达水平,以2-AACt计算基因的相对表达量。 结果: 1.A组与B组相对表达量的比较: 与A3组相比,B3组miR-21、miR-24、miR-143、miR-499相对表达量下降(P<0.05),miR-211相对表达量升高(P<0.05),miR-23a、miR-195、miR-199a相对表达量无明显变化(P>0.05);与A6组相比,B6组miR-21、miR-24、miR-23a、miR-195、miR-199a、miR-143、miR-211、miR-499相对表达量均下降(P<0.05);与A12组相比,B12组miR-21、miR-23a、miR-24、miR-195、miR-143、miR-211、miR-199a、miR-499,相对表达量下降(P<0.05);与A24相比:B24组miR-21、miR-23a、miR-199a、miR-499相对表达量下降(P<0.05),miR-143、miR-195、miR-211相对表达量升高(P<0.05),miR-24相对表达量无明显变化(P>0.05)。 2.B组相对表达量的变化趋势: 从ROSC后3小时开始,miR-21相对表达量是先下降,在6小时达到最低,而后又开始回升,B24达到最大,为0.4325±2021(P<0.05);ROSC后miR-195相对表达量是先下降,在6小时达到最低,而后又开始回升,B24达到最大,为14.8130±6.9926(P<0.01);miR-211相对表达量从ROSC后3小时开始是逐渐下降,在ROSC后12小时达到最低,为0.0061±0.0040(P<0.001),而后又回升,B24达到5.5708±2.0748(P<0.05);ROSC后miR-23a相对表达量先下降,在6小时时最低,为0.0230±0.0130(P<0.01),而后又开始回升,从12小时以后又下降,但B24仍比B6高;ROSC后miR-143的变化也是先下降在6小时达到最低后又开始回升,到24小时时达到最大为4.8613±1.7971(P<0.05);ROSC后3小时开始,miR-24相对表达量从开始逐渐上升,与B3相比,在24小时时达到最大,为1.4446±0.4554(P<0.05);从ROSC后3小时开始,miR-199a相对表达量逐渐下降,在ROSC后12小时达到最低,为0.0245±0.0133(P<0.05),而后小幅回升;ROSC后3小时起miR-499相对表达量开始下降,ROSC后6小时最低,为0.0051±0.0034(P<0.001),随后开始上升,但仍低于B3。 结论: 1.大鼠CPR后心肌损伤相关的各miRNA表达量有明显变化。 2.大鼠ROSC后心肌损伤相关的各miRNA表达量在不同时间点的表达是不相同的。 3.miRNA可能通过某种靶基因参与心肌损伤调控过程。