论文部分内容阅读
糖尿病生精功能障碍是男性糖尿病人的常见并发症,也是引起男性不育的重要原因。研究表明男性糖尿病患者不育的发病率约为35.1%,随着近年糖尿病发病率升高以及发病年龄年轻化,糖尿病不育已成为影响男性生育的重要原因,氧化应激损伤与其密切相关,但具体机制不甚明确,并缺乏有效防治方法。“消渴”是中医对糖尿病的称谓,阴虚燥热是其辨证基础,糖尿病人久病耗气伤阴,气虚精亏,气虚运化无力,表现为气阴两虚,阴损及阳,所谓“阳化气、阴成形”,阴虚内热炽盛,阴液不足以濡养精室,发展为阳萎疲乏,精冷不育。三才连梅颗粒由人参、天冬、生地黄、乌梅、肉桂、黄连六味药组方而成,其方义遵循养阴清热为本,调和阴阳,并能益气健脾,培土生精。前期实验证实三才连梅颗粒具有较好的降血糖及抗氧化作用,临床观察发现三才连梅颗粒能有效提高糖尿病患者性功能及精液质量,改善中医症候。本课题拟用三才连梅颗粒治疗糖尿病生精功能障碍小鼠,观察其对糖尿病小鼠生精功能的影响,并通过Nrf2/HO-1氧化应激信号通路探讨其对生精细胞线粒体自噬及凋亡的影响。本实验通过高脂饮食及腹腔注射链脲霉素(STZ)建立2型糖尿病(T2DM)小鼠模型。将小鼠分为4组,分别为正常对照组(Ctrl)、糖尿病模型组(DM)、三才连梅组(DM/SCLM)、二甲双胍组(DM/DMBG)。其中DM/SCLM予以6g/kg三才连梅灌胃,二甲双胍组予以200mg/kg的二甲双胍灌胃,其余组予以等量生理盐水灌胃。治疗4周后取血查血糖、糖化血清蛋白、胰岛素等代谢相关指标;查血清FSH、LH、T等指标了解性激素的变化;取小鼠附睾检测精子参数相关指标;HE染色观察睾丸组织的病理改变,透射电镜观察生精细胞超微结构的改变;ELISA检测睾丸组织中SOD、MDA、8-OHdG了解氧化应激指标的变化;Western blot及qPCR检测睾丸Nrf2/HO-1信号通路的变化;通过检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC-3、P62及透射电镜观察自噬小体,了解生殖细胞线粒体自噬的变化;通过检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax及TUNEL染色,了解睾丸生精细胞凋亡的变化。结果表明三才连梅颗粒能有效降低T2DM小鼠空腹血糖(FBG)、糖化血清蛋白(GSP),并改善胰岛素抵抗;三才连梅颗粒能增加T2DM小鼠睾丸组织抗氧化物酶SOD的表达,减少氧化应激产物MDA、8-OHdG的表达;提高血清T水平,提高T2DM小鼠睾丸指数,并提高精子密度、精子活力及精子存活率,睾丸组织切片中生精细胞凋亡明显减少,T2DM小鼠生精功能改善。同时三才连梅颗粒激活Nrf2/HO-1信号通路,减轻T2DM小鼠睾丸氧化应激损伤;降低自噬标志蛋白Beclin-1、LC3、P62的表达,减少生精细胞中自噬小体的形成,抑制生精细胞过度自噬;增加凋亡抑制基因Bcl-2的表达、减少促凋亡基因Bax表达,降低生精细胞凋亡,保护了T2DM小鼠睾丸生精功能。综上,三才连梅颗粒能有效减轻T2DM小鼠睾丸氧化应激损伤及生精细胞凋亡,其机制可能是激活Nrf2/HO-1氧化应激信号通路并抑制生精细胞过度自噬。以上结果表明三才连梅颗粒可用于防治糖尿病不育,具有良好的社会效益及经济价值,为中医药治疗糖尿病生精功能障碍提供新的思路。