背景:奥氮平(Olanzapine)是临床应用最广泛的二代抗精神病药物(SGAs),对各种症状的精神病症状均具有较好的疗效,但其引起的脂代谢等副反应不容忽视。目前,奥氮平引起脂代谢副作用的机制还不完全清楚,除调节中枢神经系统组胺H1受体、5羟色胺受体和毒蕈碱M3受体等影响摄食行为,还能通过抑制脂肪分解酶活性、激活SREBPs脂肪合成相关通路等对脂肪组织、肝脏等外周组织的脂代谢产生作用。由于临床上还未出现治疗精神病的新型药物,因此探寻二代抗精神病药物的副作用机制并改善这种副作用仍是人们关注的重点。辛伐他汀是他汀类降血脂药物,通过竞争性抑制HMG-Co A还原酶,降低内源性胆固醇的合成,促进血清胆固醇的清除,在控制血液胆固醇的含量的同时还可用于预防心血管疾病。体内外研究表明,他汀可以降低肝脏及肝细胞的甘油三酯水平,干扰肝脏脂质代谢。辛伐他汀还对神经变性疾病如缺血性脑中风、血管性痴呆、阿尔茨海默病和帕金森病等起到神经保护作用,可降低糖尿病患者发生帕金森病的风险。近年来,辛伐他汀还被报道可通过抑制雷帕霉素蛋白m TOR信号通路对多种肿瘤如神经胶质瘤、乳腺癌、结肠癌等表现出一定的增殖抑制和周期阻滞作用,还可能通过抑制m TOR调节脂代谢。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)是一类非典型丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,除调节细胞生长和能量代谢,参与肿瘤的发生发展外,还介导机体脂代谢调节,参与肥胖及糖尿病的发生发展。有关研究表明,奥氮平能够激活m TOR通路引发机体脂代谢异常,这为研究抗精神病药物的脂代谢副作用提供了又一思路。那么,辛伐他汀能否对奥氮平引起的m TOR通路的激活产生抑制作用,从而改善奥氮平引发的脂代谢异常值得研究,从而为临床联合用药改善抗精神病药物引起的脂代谢副作用提供理论基础。目的:利用实验室前期研究建立的奥氮平介导的大鼠脂代谢紊乱模型,结合肝癌细胞Hep G2和正常的肝细胞LO2细胞水平,考察辛伐他汀是否改善奥氮平诱发的肝脏脂代谢异常副作用并探究其可能的分子机制,为临床寻找药物改善奥氮平引起的脂代谢紊乱提供参考。方法:1.选用45~55g的幼年雌性大鼠36只,分为空白给药组和奥氮平给药组(3.0mg/kg/day,t.i.d),连续处理2周后,将空白给药组分为对照组和辛伐他汀组(10mg/kg/day),奥氮平组分为奥氮平继续单用组(3.0 mg/kg/day,t.i.d)和联合给药组(奥氮平:3.0 mg/kg/day,t.i.d;辛伐他汀:10 mg/kg/day),连续给药处理五周。给药期间每周检测大鼠的体重,并对饮食饮水量进行评估。2.分别取给药2周及给药处理完成后的大鼠新鲜血液,由西南大学校医院进行血清甘油三酯和胆固醇含量变化检测,并获取肝脏组织切片进行油红O染色,检测奥氮平/辛伐他汀引起的肝脏脂滴积累变化。3.采用MTT法进行奥氮平/辛伐他汀对Hep G2和LO2细胞的毒性试验,并采用合适浓度的奥氮平/辛伐他汀作用于细胞,观察不同浓度奥氮平/辛伐他汀对Hep G2和LO2细胞的脂滴积累作用。4.采用RT-q PCR技术进行奥氮平/辛伐他汀作用后大鼠肝脏及Hep G2和LO2细胞脂合成相关基因转录水平分析,探讨奥氮平/辛伐他汀对脂合成相关基因的转录水平影响。5.采用Western Blot对奥氮平/辛伐他汀作用后大鼠肝脏及Hep G2和LO2细胞内m TOR相关蛋白变化进行分析,探索奥氮平/辛伐他汀影响脂代谢变化的潜在机制。结果:1.辛伐他汀介入给药作用5周后大鼠血清TG、TC含量的变化奥氮平单独作用两周后,测得奥氮平单独给药组TG、TC含量与空白给药组相比均有显著升高,空白给药组的TG、TC含量分别为0.73±0.02 mmol/L,2.28±0.03mmol/L;奥氮平单独作用两周后的血清TG、TC含量分别为1.02±0.06 mmol/L,2.40±0.04 mmol/L。联合给药完成后,与对照组相比,奥氮平组TG、TC含量分别升高了49.41%和11.84%,辛伐他汀组TG、TC含量分别降低了30.59%和9.39%,且均具有显著性差异。与奥氮平单独给药组相比,联合给药组TG、TC含量分别降低了33.86%和11.31%,具有显著性差异。2.辛伐他汀介入给药作用5周后大鼠肝脏冰冻切片脂质积累变化与对照组相比,奥氮平组肝脏组织切片脂滴积累约显著上调了49.82%;辛伐他汀组约降低了10.11%;与奥氮平组相比,联合给药组显著降低了约26.72%。3.辛伐他汀介入给药作用5周后对大鼠肝脏脂合成相关基因转录水平变化与对照组相比,奥氮平处理组Srebp1,Fasn,Acc,Acly,Scd-1的转录水平均有显著上调,分别是对照组的2.77倍,3.84倍,1.84倍,3.53倍,11.47倍,以Scd-1最为显著;辛伐他汀处理组均有显著降低,分别降低了约57.32%,11.74%,18.31%,53.01%,36.40%;与奥氮平处理组相比,联合给药组上述基因的转录水平也显著下调,分别降低了约73.35%,47.98%,56.95%,62.84%,94.23%。4.奥氮平/辛伐他汀对大鼠肝脏mTOR蛋白表达的影响与对照组相比,奥氮平给药组m TOR的表达显著升高,但无显著性差异。奥氮平给药组p-m TOR表达量显著升高,辛伐他汀组的p-m TOR的表达量显著降低。相对于奥氮平组,联合给药组的m TOR蛋白表达量有显著降低,约降低了26.19%;联合给药组的p-mTOR蛋白表达量也有显著降低,约降低了40.14%。5.辛伐他汀对奥氮平引起的Hep G2和LO2细胞脂滴积累的干预作用1μmol/L,5μmol/L,10μmol/L的奥氮平促进Hep G2及LO2细胞内脂滴积累,且具有浓度依赖作用。1μmol/L,5μmol/L,25μmol/L的辛伐他汀分别与10μmol/L的奥氮平联合作用于Hep G2、LO2细胞后,能够干预奥氮平引起的脂质积累增多,且呈浓度依赖性。此外,50nmol/L的雷帕霉素能使Hep G2和LO2细胞脂滴积累明显降低。6.奥氮平/辛伐他汀对Hep G2、LO2细胞脂合成相关基因转录水平影响选用10μmol/L奥氮平和25μmol/L辛伐他汀单用或联用处理细胞,DMSO作为空白对照。与对照组相比,10μmol/L奥氮平能够上调脂合成相关基因Srebp1及下游基因Fasn、Acc、Acly、Scd-1的转录水平,且均具有显著性差异。25μmol/L辛伐他汀能够使各基因的转录水平降低,其中Hep G2细胞中Fasn和Acly与对照组相比具有显著性差异,LO2细胞中Srebp1、Fasn和Acly的转录水平与对照组相比具有显著性差异。与奥氮平单独用药组相比,辛伐他汀联合给药组的各基因转录水平也均有显著性降低。7.奥氮平/辛伐他汀对HepG2和LO2细胞mTOR通路相关蛋白表达的影响与对照组相比,奥氮平促进Hep G2和LO2细胞m TOR,p-m TOR,S6K1,SREBP1各蛋白表达量显著升高,辛伐他汀组各蛋白表达量均有显著降低。与奥氮平组相比,联合给药组上述蛋白表达量均受到抑制。当预先用雷帕霉素处理细胞24h后,Hep G2和LO2细胞中各给药组的m TOR,p-m TOR、SREBP1及S6K1的蛋白表达量与未采用雷帕霉素处理时的表达量均有明显降低,说明m TOR通路参与了脂滴积累过程。结论:在SD大鼠主动口服模型的基础上,辛伐他汀使奥氮平引起的胆固醇和甘油三酯水平降低,并且辛伐他汀能够降低奥氮平引起的肝脏脂滴的积累。在分子水平上,辛伐他汀作用后m TOR的蛋白磷酸化水平及脂合成相关基因的转录水平降低。在Hep G2、LO2体外细胞水平,辛伐他汀联合作用后使得奥氮平引起的细胞中脂滴含量下降,并呈现浓度依赖性,且与奥氮平但单独作用相比,辛伐他汀联合作用后m TOR磷酸化水平及下游SREBP1和S6K1的水平均下调。这表明辛伐他汀能在一定程度上改善奥氮平造成的肝脏脂代谢紊乱,且可能是通过抑制奥氮平引起的m TOR通路的激活而产生作用的,这为探寻改善SGAs导致的脂代谢异常副作用的潜在药物提供了部分理论基础。