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目的:通过对兔髓核细胞的培养,探讨炎性细胞因子IL一1β对兔髓核细胞生长的影响以及NGF和MMP-9蛋白表达的的影响。方法:1、通过培养兔髓核细胞,观察其形态,取对数期的髓核细胞,种植96孔板中,用MTT方法通过酶标仪检测OD值,来探讨不同浓度(10ng/ml IL-1β、20ng/ml IL-1β、40ng/ml IL-1β、80ng/ml IL-1β)的药物作用下髓核细胞的活力。2、细胞预培养融合达到80%后,以每孔3×105传代至6孔板中,实验组四孔,对照组一孔,于每孔上做好标记,培养24小时后更换1%胎牛血清的培养基,培养12小时,更换含10%胎牛血清的新培养基2ml;然后用40ng/ml IL-1β加入四个实验孔,分别孵育24h、48h、72h、96h后收集细胞,提取总蛋白,同时设置空白对照组,用10%胎牛血清的新培养基2ml培育96h后提取蛋白,应用Western blotting检测同一药物浓度下加药后不同时间MMP-9、NGF蛋白的表达。3、细胞预培养融合达到80%后,以每孔3×105传代至6孔板中,分成两组:对照组l孔,试验组4孔。培养24小时后更换1%胎牛血清的培养基,培养12小时。试验组分别予10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml IL-1β含10%FBSDMEM/F12培养基处理,空白对照组培养在10%FBS DMEM/F12培养基中,48h后收集细胞,提取总蛋白,用蛋白免疫印迹法检测MMP-9、NGF蛋白的表达。结果:1、原代髓核细胞培养72h后可见其逐渐贴壁,呈不规则型、长梭形,多角型,缓慢生长。5天贴壁细胞逐渐增多,大部分细胞紧贴组织块生长,呈克隆状分布,贴壁细胞占50-80%,呈多角形或纺锤形,未贴壁的细胞或组织逐渐表现呈空泡状,250倍镜下可见细胞轮廓清楚,扁平透亮,胞核清晰。培养7天后显微镜下见组织周围细胞数目明显增多,呈放射状分布,细胞生长迅速,2周左右贴壁髓核细胞细胞逐渐融合,排列紧密,呈“铺石样”。2、MTT结果显示:10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml IL-1β对兔髓核细胞活性无明显影响,四组药物处理组的细胞存活率与对照组相比无明显差异。3、IL-1β可刺激兔髓核细胞表达NGF蛋白,并且其表达量随着IL-1β刺激时间的增加而增加,差异有统计学意义(P<0.05);但是不同浓度的IL-1β刺激兔髓核细胞NGF蛋白的表达量较对照组明显升高,但各个组之间NGF的表达量无明显差异(P>0.05)。4、IL-1β可刺激兔髓核细胞表达MMP-9蛋白,并且其表达量随着IL-1β刺激时间的增加而增加,差异有统计学意义(P<0.05);但是不同浓度的IL-1β刺激兔髓核细胞MMP-9蛋白的表达量较对照组明显升高,但各个组之间MMP-9的表达量无明显差异(P>0.05)。结论:1、致炎细胞因子IL-1β能够刺激兔髓核细胞MMP-9、NGF蛋白的表达,正常的髓核细胞MMP-13、NGF蛋白则呈低表达状态。2、经炎性细胞因子IL-1β刺激的兔髓核细胞MMP-9、NGF蛋白的表达的量与作用时间有关,与炎症因子浓度无明显关系。3、在椎间盘源性腰痛患者椎间盘的病理生理改变中,炎性细胞因子能够刺激椎间盘细胞NGF的表达,诱导神经纤维长入椎间盘内部及髓核组织,同时,刺激椎间盘分泌基质金属蛋白酶,使椎间盘内部基质的降解与合成失衡,加速腰椎间盘的退变。