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背景及目的：CD40配体(CD40L)是肿瘤坏死因子家族中的一员，它在激活的T细胞上表达，可与抗原提呈细胞(APC)上的CD40结合。CD40-CD40L相互作用在激活APC及激发细胞免疫和体液免疫方面起重要作用。这样，通过转导CD40L基因有可能成为治疗恶性肿瘤的一种有效的方法。本研究旨在克隆鼠CD40配体cDNA，构建鼠CD40配体cDNA真核表达重组体并对鼠CD40配体基因治疗鼠肝细胞癌作初步研究。 材料与方法：1、用免疫组化法检测原发性肝细胞癌组织CD40的表达情况；2、从Balb／C小鼠脾细胞抽提总RNA，用特殊的引物和特定的条件下一步RT-PCR方法合成和扩增鼠CD40配体cDNA；3、用T-A克隆方法将鼠CD40配体eDNA片段直接连接到T载体上构建中间表达重组体pUCm-T--mCD40L cDNA，NheⅠ和EcoRⅠ限制性双酶切后，构建真核表达重组体pcDNA3.1~+-mCD40L cDNA；4、用脂质体包裹转染H22细胞，G418筛选建立真核表达细胞株；5、将未转染和转染真核表达重组体pcDNA3.1~+-mCD40L cDNA的H22细胞分别注入同源小鼠左侧腹皮下，每周观察肿瘤的生长情况。 结果：1、40％的肝细胞癌组织CD40染色呈阳性。2、RT-PCR分析显示扩增出与mCD40L cDNA相一致的大小约0.8kb的片段。3、中间重组体pUCm-T--mCD40L cDNA和表达重组体pcDNA3.1~+-mCD40L cDNA均经NheⅠ与EcoRⅠ酶切鉴定和DNA序列测定为完整正确的mCD40L cDNA序列插入。4、脂质体介导表达重组体pcDNA3.1~+-mCD40L cDNA转染H22细胞，G418筛选18天后，扩大培养，经RT-PCR鉴定证实获得表达重组体pcDNA3.1~+-mCD40L cDNA转染的稳定细胞株。5、注射未转染CD40配体基因的H22细胞的同源小鼠均出现皮下瘤结节，而注射转染了CD40配体基因的H22细胞的同源小鼠未出现瘤结节。 结论：1、40％原发性肝细胞癌组织中CD40的表达。2、成功克隆了鼠CD40配体cDNA和构建了真核表达重组体pcDNA3.1~+-mCD40L cDNA。3、完成了稳定转染细胞株的建立。4、转染了鼠CD40配体基因的H22细胞在同源小鼠中的致瘤性降低。