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本课题通过对青蒿(Artemisia annua L.)挥发油进行GC/MS分析,确定了其主要化学组分;通过对青蒿挥发油抑制植物病原菌作用的研究,发现青蒿挥发油对受试的植物病原菌具有广谱抗菌活性;通过与市售农药多菌灵的抗菌活性比较,了解了青蒿挥发油的抗菌强度;并初步对青蒿挥发油的抗菌机理进行了研究和分析。从而为开发新的植物源抗菌剂奠定一定的基础。
实验结果如下:
①采用气质联用(GC/MS)法对青蒿挥发油和青蒿素母液挥发油的化学成分进行分析,发现青蒿挥发油的主要化学成分是樟脑(23.05%)、石竹烯氧化物(9.36%)、表蓝桉醇(6.86%)、α-蛇床烯(5.11%)等;青蒿素母液挥发油的主要化学成分为戊烷(32.99%)、樟脑(22.22%、α-甜没药烯(5.20%)等。青蒿素挥发油和青蒿素母液挥发油的化学成分中有樟脑、石竹烯、β-蒎烯、龙脑等相同物质。
②采用生长速率法,研究了青蒿挥发油对十种受试植物病原真菌的抗菌活性,发现在青蒿挥发油浓度为400μg/mL时,对三种植物病原真菌抑制率比较高,超过了40%;对四种真菌的抑制率为26.76%到39.91%;对其他的真菌也有一定的抑制;青蒿挥发油对四种受试病原真菌的毒力作用测定发现,青蒿挥发油对瓜类绵腐病菌(Pythium aphanidermatum)、小麦赤霉病病菌(Fusarium graminearum)、玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)和黄瓜尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp cucumeris)的抑制中浓度(EC50)在776.50μg/mL到1637.45μg/mL之间。青蒿精油的主要成分樟脑对黄瓜尖孢镰刀菌的EC50为2220.74μg/mL,高于青蒿挥发油。
③选用黄瓜尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp cucumeris)作为抗菌机理研究的目标菌,研究了青蒿挥发油对植物病原真菌的抑制机理:通过对黄瓜尖孢镰刀菌的生长观察发现,挥发油能够使真菌的菌丝断裂,致使生物量降低。通过电导率法和紫外分光光度法研究青蒿挥发油对真菌细胞膜系统的作用,结果显示随着挥发油浓度的增加,细胞膜伤害率(MIP)的值几乎成指数曲线上升,在(1.OOmg/mL-1.60mg/mL)阶段,MIP的提高幅度较低,在(1.60mg/mL-2.00mg/mL)阶段,MIP有较大的提高;紫外分光光度法研究发现,随着时间的增加,真菌中的核酸类物质泄漏量增大。据此推知青蒿挥发油能够破坏黄瓜尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum f.sp cucumeris)的质膜,降低其选择通透性,使细胞内的物质大量外渗。采用3,5-二硝基水杨酸法测定黄瓜尖孢镰刀菌对营养物质的吸收利用时发现,空白培养基还原糖的含量一直较低于处理培养基,可见青蒿挥发油能够影响菌丝体对还原糖的吸收利用。采用比色法测定青蒿挥发油对真菌细胞内琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的影响,在作用96h后,酶比活力比对照组低29.9%,说明青蒿挥发油对病原菌的氧化-还原系统造成了一定程度的破坏,影响了菌丝的生物合成。