滋阴通络方对糖尿病大鼠血清MBP及坐骨神经中IGF-1表达的实验研究

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目的:通过观察滋阴通络方对糖尿病大鼠血清中碱性髓鞘蛋白(myelin basic protein,MBP)含量以及坐骨神经中胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)表达的影响,探讨滋阴通络方对糖尿病大鼠周围神经并发症的预防及治疗作用。方法:清洁级8周龄雄性wistar大鼠50只,体重180-220g,适应性喂养4天,随机选取6只雄性wistar大鼠作为对照组,其余予以一次性STZ腹腔注射(按55mg/kg的剂量)造模,72小时后,大鼠禁食12h,尾静脉取血,测定血糖≥16.7mmol/L者为成模鼠纳入实验,随机分为模型组、甲钴胺组(JGA)、滋阴通络中剂量组(ZYZ)、滋阴通络高剂量组(ZYG)。复查血糖,血糖低于16.7mmol/l的大鼠予以剔除。在造模后4周及用药8周后检测大鼠体重、血糖。实验结束时,检测大鼠周围神经热痛阈值。10%水合氯醛麻醉,股动脉取血,酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定血清中MBP含量。暴露出左侧坐骨神经,分离并去除神经周围结缔组织,保留坐骨神经,截取3-4cm置于固定液中固定,脱水、包埋进行免疫组化,观察IGF-1在坐骨神经中的表达;HE染色光镜下观察坐骨神经结构。结果:1一般情况观察:实验过程中,正常组大鼠状态良好,模型组大鼠出现多饮多尿、消瘦、蜷卧拱背、毛发稀疏竖立无光泽。中药组及甲钴胺组大鼠亦出现消瘦、毛发稀疏无光泽等类似表现,但是与模型组相比多饮多尿症状减轻。2血糖、体重变化:造模后4周模型组、甲钴胺组(JGA)、滋阴通络中剂量组(ZYZ)、滋阴通络剂高量组(ZYG)大鼠体重(g),与正常组比体重明显减轻,比较有统计学意义(P<0.01)。实验结束时,JGA组、ZYZ组及ZYG组体重较模型组升高,比较有统计学意义(P<0.05)。JGA组、ZYZ组及ZYG组糖尿病大鼠血糖值均>16.7mmol/l,各用药组血糖与模型组相比无差异(P>0.05)。灌胃完毕后,ZYZ组及ZYG组血糖较用药前有所降低,但是无差异(P>0.05)。3摇尾实验结果:实验结束时与空白对照组(48.2±1.3)比较,JGA组(45.8±1.4)、ZYZ组(46.1±2.2)、ZYG组(45.7±2.2)以及模型组(42.3±1.5)痛阈值与正常空白对照组相比有差异,比较有统计学意义(P<0.05);JGA组、ZYZ、ZYG组痛阈值均明显高于模型组,比较有统计学意义(P<0.01),组间比较无差异。4血清MBP含量:灌胃结束后,模型组大鼠MBP含量(5.27±1.07)较正常组(1.81±0.66)明显升高,比较有统计学意义(P<0.05);各用药组血清MBP含量与模型组比较有统计学意义(P<0.05);JGA组(3.58±0.43)与ZYZ组(3.64±1.29)相比无统计学意义(P>0.05),JGA组与ZYG组比较,ZYG组血清MBP含量最低,比较有统计学意义(P<0.05)。5IGF-1表达:用平均光度值测定,IGF-1在坐骨神经中的表达分别为正常组(0.30±0.02)、模型组(0.13±0.04)、JGA组(0.21±0.36)、ZYZ组(0.162±0.01)、ZYG组(0.270±0.04)。与模型组相比,JGA组、ZYZ组与ZYG组平均光度值明显升高,比较有统计学意义(P<0.005);ZYG组与JGA组相比有统计学意义(P<0.005);JGA组、ZYZ组、ZYG组IGF-1的平均光度值低于正常对照组,比较有统计学差异(P<0.001)。6坐骨神经HE染色:光镜下观察,正常组可见神经纤维排列紧密,轴索髓鞘结构清晰,轮廓分明;模型组可见明显的坐骨神经形态学改变,以髓鞘肿胀、脱失,神经轴索萎缩为典型表现;甲钴胺组神经纤维排列稀疏、髓鞘未见明显变薄,存在少量空泡样变,轻度轴索萎缩;滋阴通络中剂量组神经纤维排列稀疏,脱髓鞘轻度变薄,存在少量空泡样改变,未见明显轴索萎缩;中药高剂量组神经纤维排列整齐,未见明显髓鞘肿胀脱失,神经轴索未见明显萎缩。结论:1实验结束时,通过甩尾实验结果证实模型各组大鼠存在神经功能受损表现,糖尿病周围神经病变大鼠模型制备成功。2糖尿病周围神经病变大鼠血清中MBP含量以及坐骨神经组织中IGF-1表达存在差异。3滋阴通络方可以降低血清中MBP含量,上调大鼠坐骨神经中IGF-1蛋白表达,改善糖尿病大鼠周围神经组织的代谢活性。4滋阴通络方对糖尿病大鼠周围神经结构和功能损伤具有保护作用。
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