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第一部分:大鼠心肺复苏模型的建立
目的:建立一种稳定的大鼠心肺复苏模型。
方法:成年SD大鼠66只,随机数字法分为正常对照组8只,假手术组8只,复苏组50只。复苏组从颈外静脉弹丸式注射氯化钾致大鼠心搏骤停,持续5min后进行胸外按压和机械通气。假手术组只进行经口气管插管和血管内置管。监测基本生命体征,记录自主循环恢复时间,对复苏后24h、72h的进行神经功能评分,观察正常对照组、假手术组和复苏后1h、12h、72h各时间点的脑组织病理形态学变化。
结果:大鼠注入氯化钾后立即出现循环停止,自主循环恢复时间为(343.6±120.2)s,自主循环恢复率为80％(40/50),24h存活率为76%,72h存活率为74%。复苏后24h神经功能评分为(64.73±1.66)分,72h为(73.19±1.33)分。复苏后1h脑组织缺血缺氧性损伤最重,24h次之,72h逐渐好转。
结论:本模型稳定可靠,操作简便且易于复苏,最明显的改进之处在于采用经口气管插管法来最大限度地减少组织损伤和对机体的影响,从而更加适合于心肺复苏后期的脑复苏研究。
第二部分:精脒/精胺-N1-乙酰基转移酶2、HIF-1α在心肺复苏后大鼠脑组织表达的动态变化规律
目的:研究心肺复苏后大鼠脑组织中精脒/精胺-N1-乙酰基转移酶2(spermidine/spennine-N1-acetyltransferase2,SSAT2)与缺氧诱导因子-1α(bypoxia inducible factor1 alpha,HIF-1α)表达的动态变化规律,分析二者相关性。
方法:88只成年SD大鼠随机数字法分为正常对照组、假手术组和心肺复苏组。其中假手术组和心肺复苏组再分为1、8、24、48、72h5个亚组,每亚组8只。采用RT-PCR、Western blot方法分别检测脑组织中HIF-1αmRNA和HIF-1α、SSAT2蛋白的表达。
结果:SSAT2的表达在复苏后明显降低,1h(0.314±0.027,P＜0.01)表达最低,随后下降趋势逐渐减弱(P＜0.01),至72h(0.731±0.024,P＞0.05)时恢复到正常对照组水平(0.736±0.020),而假手术组SSAT2的表达与正常对照组相比无显著变化(P＞0.05)。HIF-1αmRNA的表达在复苏后1h(0.245±0.021,P＜0.05)时降低,但8h(0.430±0.019,P＜0.05)时明显增强,24h(0.387±0.018,P＜0.05)、48h(0.385±0.019,P＜0.05)轻度增加,至72h时回落到正常对照组水平(0.343±0.022):但HIF-1α蛋白表达水平在复苏后1h(0.755±0.012,P＜0.01)显著增高,随后增高趋势逐渐减缓(P＜0.01),至72h(0.033±0.002,P＜0.01)时仅轻度增高,而在正常对照组和假手术组未能检测出HIF-1α表达。SSAT2表达与HIF-1α表达在复苏后72h内呈负性相关(r=-0.945,P＜0.001),SSAT2表达与HIF-1αmRNA表达在复苏后8～48h呈负相关(r=-0.614,P=0.001)。
结论:在心肺复苏后72h内,大鼠脑组织HIF-1α蛋白表达升高且升高趋势逐渐减弱,SSAT2表达下降且下降趋势逐渐放缓;复苏后8～48h时,HIF-1αmRNA表达增加且增加趋势逐渐减缓。SSAT2与HIF-1α、HIF-1αmRNA表达呈负相关且变化趋势相反,提示SSAT2对HIF-1α、HIF-1αmRNA可能起负性调节作用。