高钙离子刺激人肾小管上皮细胞表达HMGB1和IL-6的体外研究

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:haiyaozhucewohai
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目的:观察不同浓度钙离子刺激下人肾小管上皮细胞(HK-2)表达白介素-6(IL-6)和高迁移率族蛋白-1(HMGB1)的水平。方法:在体外培养HK-2。在DMEM-F12培养基中加入可溶的二水氯化钙晶体(CaCl2·2H2O),配成不同浓度氯化钙溶液(2.5 mM,5 mM,10mM)作为药物组,刺激HK-2细胞6小时。实验分四个组:a.正常对照组(无血清DMEM-F12培养基);b.钙离子I组(2.5 mM CaCl2+DMEM-F12培养基);c.钙离子II组(5 mM Ca Cl2+DMEM-F12培养基);d.钙离子III组(10 mM CaCl2+DMEM-F12培养基)。共同孵育6小时后,分别采用CCK-8试剂法检测细胞增殖情况,微板法测定各组细胞上清液中LDH活性,酶联免疫吸附试验(Elisa)检测各组细胞上清液中白介素-6的含量,Western blot法检测人肾小管上皮细胞中HMGB1的表达情况。结果:CCK-8法在酶标仪(450nm处)测定a组、b组、c组、d组的OD值分别为1.111±0.063、1.020±0.048、0.981±0.076、0.856±0.075,其中b组、c组、d组OD值分别与a组OD值相比差异均有统计学意义(p<0.05);d组OD值分别与b组、c组OD值相比差异均有显著统计学意义(p<0.01);而b组和c组相比无明显统计学差异(p>0.05)。微板法测定a组、b组、c组、d组细胞上清液中LDH活性分别是(28.79±11.12)U/L、(50.93±11.72)U/L、(75.61±12.30)U/L、(211.32±10.40)U/L。经统计学分析,b组、c组、d组分别与a组相比均具有统计学差异(p<0.05);d组分别与b组、c组相比均有显著统计学差异(p<0.01);b组和c组相比具有统计学差异(p<0.05)。Elisa结果提示,白介素-6在a组、b组、c组、d组上清液白介素-6含量分别为(299.92±14.13)pg/ml、(421.63±20.56)pg/ml、(439.23±14.95)pg/ml、(464.77±24.95)pg/ml。经统计学分析,b组、c组、d组分别与a组(对照组)比较均具有显著统计学差异(p<0.01);d组与b组比较有统计学差异(p<0.05);c组与d组、b组分别比较均无统计学差异(p>0.05)。Western blot检测发现,HMGB1蛋白在b、c、d组的相对表达量明显高于a组,相比均具有统计学差异(p<0.05);c组、d组分别与b组相比有显著统计学差异(p<0.01);d组和c组比较无明显统计学差异(p>0.05)。结论:在高钙离子刺激下,HK-2高表达IL-6和HMGB1,伴细胞损伤出现。这些炎性因子可能参与了肾结石的形成过程。
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