河南省小麦全蚀病菌变种类型鉴定及致病力测定

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小麦全蚀病是小麦上的毁灭性病害,近几年该病害在河南省的危害逐年加重,严重影响了河南省小麦的安全生产。为了弄清楚河南省小麦全蚀病病原菌的情况,本试验从河南省郑州、许昌、开封、漯河、商丘、周口和驻马店等7个地区10个县(市)分别采集具有典型症状的小麦全蚀病病株样本,经室内组织分离、纯化,共得到小麦全蚀病菌74株。通过对供试菌株进行形态学,生理生化特性的鉴定,并对其rDNA-ITS区段序列和致病力进行分析和测定,旨在确定河南省小麦全蚀病菌变种类型,以及不同地区,不同菌株之间的致病力差异。形态学鉴定的结果表明:在PDA培养基上,菌落呈圆形,生长初期呈现灰白色,后期颜色加深,变成灰褐色乃至黑色,菌落的边缘向中心反卷。所有供试菌株均有褐色粗壮的匍匐菌丝,并在分枝处形成“∧”的典型特征;均产生瓶梗孢子,新月形或者半月形;只产生卵圆形,长棒形或者近球形的简单附着枝,常簇生,形成微菌核团;采用PD三角瓶法人工诱导子囊壳,供试菌株均可产生子囊壳,埋生或者半埋生,也多见于瓶壁的菌丝间,单生,壳体球形或卵圆形,黑色,外有茸状菌丝;子囊单壁,成熟后棍棒状,上部钝圆,下部稍窄具柄,大小为98.6~127.9μm×9~15μm;子囊孢子线形,稍弯曲,成熟的子囊孢子具有清晰的隔膜,大小为98.6~127.9μm×9~15μm。生理生化特性的研究分析结果显示:大多数供试菌株的最适宜生长温度为25℃,最适宜PH为7.0。2.5%的新鲜燕麦汁PDA培养基对供试菌株的生长有明显的抑制作用。而1%L-半胱氨酸PDA培养基对于供试菌株产生的作用则大不相同,部分菌株生长速度减慢,部分菌株生长速度加快,少数菌株的生长速度几乎没有变化,因此,L-半胱氨酸不能作为鉴定变种的依据。综上所述特征,供试74株河南省小麦全蚀病菌均属于禾顶囊壳小麦变种(Gaeumanomycesgraminisvar.tritici)。利用Rachadwong和王美南设计的针对禾顶囊壳变种的特异性引物对供试菌株进行PCR检测,通过对产生的特异性条带进行观察,结果显示,所有菌株均得到了大小为870bp的DNA片段,与禾顶囊壳小麦变种产生的条带大小一致,并无其他变种的特异性条带出现。利用真菌通用引物ITS4和ITS5针对供试菌株基因组的ITS1-5.8s-ITS2进行PCR扩增,使用MEGA4.1软件对PCR产物的测序结果进行ITS聚类分析,建立系统发育树后,结果显示:本实验的74株供试菌株全部和6株GenBank登录的禾顶囊壳小麦变种代表性菌株聚在了一起,具有很高的同源性,与其他变种的遗传距离相对较远,可以明显的与其他变种区分开来。以上两种分子技术的研究结果与形态学鉴定的结果相符。温室测定74株小麦全蚀病菌菌株对小麦的致病力,结果显示,河南省小麦全蚀病菌菌株之间致病力存在显著性差异,分为强、中、弱三种致病力类型,主要以强,中致病力类型为主,分别占63.89%和29.73%。以平均病情指数为依据,河南省不同地区间的小麦全蚀病菌致病力存在一定的差异,以周口、商丘、漯河等地区菌株的致病力最强,郑州地区菌株的致病力最弱。河南省内同一地区(以开封地区为例)不同小麦全蚀病菌菌株之间的致病力存在极显著性差异。
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