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四环素类抗生素的高抗微生物活性和相对较低的成本,使其不仅广泛应用于治疗疾病的医疗实践,还在畜牧养殖业中被广泛用作生长促进剂和治疗药物,同时也广泛应用于食品工业,添加入食品中以延长食物储存期或是防止食品运输途中的损失。但是,滥用四环素类抗生素很可能会在食物中残留,严重危害人类健康。本研究拟建立一种可对牛奶中8种四环素类抗生素（MINO、4-ETC、TC、OTC、CTC、4-ECTC、MTC、DC）进行定性、定量检测的简单、灵敏、有效的等度洗脱模式下反相高效液相-紫外检测方法,并通过比较和优化常用于四环素类抗生素前处理的几种不同固相萃取柱产品及其萃取流程,获得回收率高、流程简便、价格便宜的固相萃取方法,用于牛奶样品检测。1.四环素类抗生素的等度洗脱HPLC新方法研究。本文通过对流动相改性剂浓度、流动相配比、检测波长、流速、柱温、色谱柱的优化和筛选,成功开发出13分钟内同时测定8种四环素类抗生素残留的超灵敏等度洗脱HPLC-UV方法。待测样品通过手动进样器进入高效液相色谱系统,进样量200μL,流动相为3.5mmol/L甲烷磺酸（pH=2.5）/甲醇/乙腈（68:20:12,v/v/v）,流速1.0ml/min,柱温40℃,在Waters XBridge C18色谱柱（150mm×4.6mm I.D.,3.5μm）上进行等度洗脱分离,经紫外检测器在350nm检测波长下定性。2.不同SPE柱对牛奶中四环素类抗生素残留前处理的比较研究。本文使用固相萃取技术对待测牛奶样品进行预处理。选择几种对四环素类抗生素萃取效果较好、应用较广泛的反相SPE柱,对固相萃取流程进行逐步优化,对比不同SPE柱萃取效果。最终确定使用Oasis HLB固相萃取柱,以pH为4.0±0.05的0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液为提取液,每次提取液体积为20mL重复两次提取,以1%甲酸水溶液及纯水为淋洗液依次淋洗,以乙腈作为洗脱液,采用氮吹仪在40℃温度下通过氮气吹干。评价结果表明,在最佳高效液相色谱条件下,所有分析物的校准曲线在20nmol/L4000nmol/L浓度范围内均有良好的线性（R2>0.9990）,仪器检出限低至0.8nmol/L。使用Oasis HLB固相萃取柱对待测牛奶样品进行固相萃取预处理,加标牛奶样品中8种四环素类抗生素的平均回收率在63.53%116.32%之间,日内相对标准偏差小于8.30%,日间相对标准偏差小于14.81%。本研究建立了简便、灵敏测定牛奶中8种四环素类抗生素残留的等度洗脱HPLC-UV方法,创新性的选择甲烷磺酸作为流动相改性剂添加进入流动相体系,不但可分析碱性化合物,还与质谱检测具有良好的兼容性,为相关高效液相色谱研究中选择合适的流动相改性剂提供了新的研究亮点。通过实际样品检测,表明该方法在实际检测中操作简便、分析快速、选择性好、回收率高,具有十分广阔的应用前景。