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研究目的1.分析肝脓肿患者的临床特点,观察经皮穿刺引流术对肝脓肿的治疗效果,分析影响疗效的因素。2.肺炎克雷伯菌感染后,比较糖尿病小鼠和正常小鼠肝脏炎症反应病理学、细胞因子及炎症信号通路蛋白表达量差异,探讨糖尿病小鼠肺炎克雷伯菌肝脓肿发病率高的分子机制。研究方法1.收集上海某三甲医院介入血管外科从2011年1月至2016年1月收治的121例肝脓肿患者临床资料。对确诊肝脓肿患者,充分抗感染的同时,CT评估病灶液化情况,在CT引导下行经皮肝穿刺引流术,分析患者的一般资料、实验室检查、脓肿大小及位置、合并症、致病菌、治疗后的病死率、并发症率、住院时间及其影响因素。2.(1)DM模型构建:有48只健康雄性的ICR小鼠,8周龄。从中随机选取24只小鼠,用STZ腹腔注射,以120mg/kg的剂量,构建糖尿病模型,作为糖尿病组,另外24只小鼠腹腔注射等量柠檬酸盐缓冲液,作为正常组。1周后,用血糖仪监测血糖,如果小鼠血糖值>20mmol/L,视为糖尿病模型小鼠。(2)肝脓肿模型构建:DM模型构建成功后1个月,制备3×10*7CFU/50ul肺炎克雷伯菌细菌混悬液,随机选取糖尿病组和正常组小鼠各12只,按每只小鼠口腔灌胃3×10*8 CFU肺炎克雷伯菌的剂量感染小鼠。2组各另外8只小鼠口腔灌胃等剂量的PBS溶液。(3)实验分组:肺炎克雷伯菌-糖尿病组、肺炎克雷伯菌-正常组、PBS-糖尿病组、PBS-正常组。(4)肝组织病理学检查:在灌胃72h以后,在无菌条件下取出小鼠肝脏。病理学观察比较pbs-糖尿病组、pbs-正常组、肺炎克雷伯菌-糖尿病组、肺炎克雷伯菌-正常组肝细胞水肿程度、炎症细胞聚集情况、形成脓肿情况。(5)elisa法比较4组小鼠肝脏炎症细胞因子il-1β、il-2、il-6、il-10、mip-1α、tnfα的表达量,westernblot观察4组小鼠肝脏iκΚα和iκκβ、iκbα、nf-Κb及磷酸化值的表达量。研究结果1.共有121例肝脓肿患者纳入研究,均做了脓液细菌培养或血培养。其中检出肺炎克雷伯菌60例(49.59%),大肠杆菌3例(2.5%)。肝脓肿合并糖尿病60例(50.42%)。2例患者穿刺引流后死亡,病死率为1.65%,影响患者死亡率的因素为高龄、基础疾病,脓肿直径及实性成分;2例患者穿刺引流后出现肝周脓肿、腹壁脓肿,并发症率为1.65%,对并发症积极处理后达到临床治愈,影响并发症率的因素主要为手术操作欠妥;119例患者均达到临床治愈,治愈率为98.34%,平均住院时间为(15.13±6.07)天。影响住院时间的危险因素为:脓肿个数x6(r=0.232,p=0.021),脓肿大小x7(r=0.26,p=0.005),白细胞计数x8(r=0.238,p=0.009)。进一步分析显示影响因素与住院时间相关性的多元线性回归方程有统计学意义(p<0.05),多元回归方程为:y=-3.438+3.055x6+0.527x7+0.297x8,f=5.819,r2=0.416。性别、年龄、糖尿病、致病菌、脓肿位置对住院时间的影响无统计学差异(p>0.05)。2.stz注射一周后,用血糖仪检测糖尿病组24只小鼠血糖值,均>20mmol/l。观察糖尿病组小鼠,毛黄、稀疏,多饮、多食、多尿,消瘦,呈现明显的“三多一少”症状。糖尿病组小鼠血糖较正常组明显升高(p<0.05),糖尿病组与正常组小鼠体重无明显差异(p>0.05)。肺炎克雷伯菌灌胃感染小鼠后,无菌条件下取小鼠肝脏,he染色实验结果表明:肺炎克雷伯菌-糖尿病组脓肿形成个数较肺炎克雷伯菌-正常组增多(p<0.05)。elisa实验结果表明:肺炎克雷伯菌-糖尿病组肝脏IL-1β、IL-2、IL-6、MIP-1α、TNF-α的表达量明显高于肺炎克雷伯菌-正常组(P<0.05),肺炎克雷伯菌-糖尿病组肝脏IL-1β、IL-2、IL-6、MIP-1α、TNF-α表达量高于PBS-糖尿病组(P<0.05),肺炎克雷伯菌-正常组肝脏IL-1β、IL-2、IL-6、MIP-1α、TNF-α表达量高于PBS-正常组(P<0.05)。Western blot实验结果表明:肺炎克雷伯菌-糖尿病组P-IΚΚβ、P-IΚΒα、P-NFΚΒ表达量明显高于肺炎克雷伯菌-正常组(P<0.05),肺炎克雷伯菌-糖尿病组P-IΚΚα、P-IΚΚβ、P-IΚΒα、P-NFΚΒ表达量高于PBS-糖尿病组(P<0.05),肺炎克雷伯菌-正常组P-IΚΚα、P-IΚΚβ、P-IΚΒα、P-NFΚΒ表达量高于PBS-正常组(P<0.05)。研究结论1.CT引导下经皮肝穿刺引流联合抗生素能有效治疗肝脓肿,具有病死率低,治愈率高,并发症率低、住院时间短等优点,值得临床推广应用。糖尿病确实是诱发肝脓肿的高危因素,但当血糖水平控制在正常范围内时,糖尿病可以不影响住院时间。2.本实验成功构建了ICR小鼠1型糖尿病模型及小鼠的肺炎克雷伯菌肝脓肿模型,并且证实了糖尿病小鼠肺炎克雷伯菌肝脓肿发病率增高,探索了其分子机制是细胞NF-ΚΒ信号通路的过度激活扩大了炎症反应进程,加重了肝细胞坏死程度,导致脓肿发病率增高。