研究背景肥胖是能量和代谢失衡性疾病,主要特点为局部脂质沉积过多。脂质代谢异常时会引发包括心血管异常、高脂血症、脂肪肝、糖尿病等一系列的代谢相关性疾病。肝脏是体内重要的物质代谢器官,当肝内脂质代谢紊乱发生时,最常见的病理改变就是肝脂肪变性。绝经后的妇女与绝经前的妇女相比,由于体内激素水平变化明显;因而她们对肥胖相关的代谢紊乱更为敏感,并主要表现为腹腔内脂质沉积严重,且罹患肥胖诱导的相关代谢性疾病的风险也随之增高。相关动物实验也表明,卵巢摘除后动物有较高的体重和脂肪组织,且相较于正常雌性动物,其脂肪肝及肝纤维化的病理进展也更为迅速。目前已知非酒精性脂肪肝病的发病机制可能与内质网应激有关。研究表明,非酒精性脂肪肝病中可观察到内质网应激的发生。而且当内质网应激持续发生时,也会导致肝内脂质沉积,致使肝细胞内环境稳态失衡。同时,内质网应激条件下自噬被激活,作为对应激压力的响应机制,自噬通过去除未折叠或错误折叠蛋白质和细胞器,维持细胞内物质转化。PERK是内质网应激的传感器,可刺激e IF2α磷酸化并激活ATF4转录翻译过程,p-e IF2α去磷酸化过程则受到PP1复合体的调控。Salubrinal是一种人工合成的小分子化合物,可以阻断e IF2α通路中p-e IF2α的去磷酸化,因此其有可能为内质网应激相关疾病提供治疗策略。研究目的为了研究Salubrinal通过调控e IF2α信号通路治疗肥胖诱导的非酒精性脂肪肝病的潜在治疗机制,本实验采用高脂饮食喂养或合并OVX卵巢去势模型检测内质网应激在非酒精性脂肪肝病疾病进展中扮演的重要角色。为了进一步明确机制,本研究将Salubrinal作为e IF2α信号通路的干预工具,探讨调控内质网应激及其诱导下的自噬在调节脂代谢紊乱、抑制脂质沉积的作用。研究方法按随机数字表法将95只14周龄的C57BL/6雌性小鼠分为五组:对照组(SC,n=19)、高脂组(HF,n=19)、Salubrinal治疗组(HFS,n=19)、高脂饮食卵巢摘除组(HO,n=19)、高脂卵巢摘除Salubrinal治疗组(HOS,n=19)。除SC组外,小鼠进行假手术或双侧卵巢摘除术并且保持高脂饮食。造模8周后,HS组和HOS组进行皮下注射Salubrinal治疗8周(注射剂量1mg/kg)后采集小鼠眼眶血液进行血脂分析,分离并收集小鼠肝脏、腹部各部位脂肪进行湿质量测定。为评价Salubrinal对非酒精性脂肪肝病的影响和作用机制,子宫周脂肪组织和肝脏组织通过用HE、油红O染色组织学分析方法观察小鼠的病理改变并评定各组疾病进展;采用Western Blot检测e IF2α信号通路和自噬相关蛋白的表达。体外实验中,肝细胞脂肪变诱导采用Hep G2细胞株,通过油酸进行诱导;脂肪细胞成脂分化采用3T3-L1细胞株,通过“鸡尾酒”法(吲哚美辛、IBMX、地塞米松、胰岛素)进行诱导,并提取脂肪细胞蛋白通过Western Blot分析内质网应激和自噬相关蛋白的表达。研究结果与年龄相关对照组相比,肥胖小鼠的血脂水平和脂肪组织增加,Salubrinal通过阻断脂质紊乱显著缓解了小鼠的肥胖表型以及全身体脂含量。同时,Salubrinal通过抑制脂质沉积逆转了肥胖小鼠相关生化指标的异常并缓解肝细胞变性和肝纤维化进展的严重程度。体内体外的实验结果表明,Salubrinal干预后,肝细胞和脂肪细胞脂质沉积明显减轻。此外,Western Blot结果表明Salubrinal通过增加p-e IF2α的表达和下调ATF4的水平并减少CHOP的表达量抑制ER应激;并通过增加LC3II/I和抑制p62的表达促进自噬。最后,相关分析表明,脂质生成与内质网应激相关。结论本研究使用高脂饮食合并OVX卵巢摘除手术诱导非酒精性脂肪肝模型,证明:1)ER应激与NAFLD相关,并会影响NAFLD的相关病理改变。2)Salubrinal抑制脂肪变性,减少脂滴的形成和沉积。3)Salubrinal增加ER应激相关p-e IF2α、ATF4的表达,并减少CHOP的表达。4)Salubrinal通过调节LC3和p62促进自噬。总之,我们证明了e IF2α在肥胖诱导的非酒精性脂肪肝的发病机制中扮演着重要角色。本研究发现内质网应激可有效减轻肝细胞脂肪变性,抑制脂质沉积。