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目的：1.采用多肽合成的方式制备SP-D抗原，以及制备SP-D多克隆抗体；2.建立豚鼠HGPRT基因缺陷型瘤细胞系，并制备豚鼠SP-D单克隆抗体；3.制备诊断用的纳米磁微粒；4.建立SP-D纳米磁微粒化学发光免疫分析法（NM-CLIA）为基础的SP-D定量免疫学检测技术平台；5. NM-CLIA定量检测人血清SP-D，并初步探讨血清SP-D在肺相关疾病中的临床意义。方法：1.应用DNAStar生物分析软件，采用Jameson-Wolf法和Emini法对SP-D蛋白的抗原指数和蛋白表面可及性进行预测，多肽合成SP-D抗原，经HPLC纯化，质谱鉴定，并采用重氮法制备SP-D-BSA，以此免疫原制备SP-D多克隆抗体；2.豚鼠转化胚胎细胞104C1细胞经200rad60Coγ射线辐照诱导，并用8-AG培养筛选出HGPRT基因缺陷型瘤细胞，以此豚鼠瘤细胞制备豚鼠SP-D单克隆抗体；*本课题由国家自然科学基金资助（30872417）3.采用共沉淀法制备葡聚糖包覆的纳米磁性微粒，经表面羧基化处理后得到诊断用的纳米磁微粒，并以EDC法制备成纳米磁微粒-SA；4.建立血清SP-D纳米磁微粒化学发光免疫分析法，并对其进行方法学评价；5.以建立的NM-CLIA试剂定量测定健康人、矽尘暴露人群、ILD患者、ALI患者和COPD患者血清中SP-D蛋白水平，并初步评价其作为肺相关疾病诊断生物标志物的临床意义。结果：1.应用DNAStar生物分析软件预测到三个SP-D线性抗原表位暴露机率相对较大氨基酸序列分别为：1（20-35aa），2（42.71aa），8（316-332aa），本次实验选择线性抗原表位暴露机率最大一段多肽：1（20-35aa），氨基酸序列为：eaemktyshrtmpsac（16aa；MW:1875Da）HPLC纯化后多肽纯度为95.5%，经质谱鉴定偶联比为：SP-D：BSA=4.9:1；多抗纯度>95%，效价>1：106；2.建立了能稳定分泌豚鼠SP-D单克隆抗体的5株杂交瘤细胞株，分别命名为2B2、3F1、3H4、4C7和5A3，经类似物的交叉反应实验证实，其中2B2、3F1、4C7和5A3的特异性良好，与SP-D可进行特异性结合，对SP-A、SP-B、SP-C不发生交叉反应。经连续冻存40次后，3F1分泌抗体的能力最稳定；经Protein G亲和纯化系统大量制备SP-D单克隆抗体，纯度>97%，效价>1：106，并能识别特异性的SP-D蛋白的（20-35aa）肽段。3.制备所得纳米磁性微粒粒径约300nm，均一性良好。并以EDC法制备成纳米磁微粒-SA，37℃烘箱破坏试验7天后，稳定性良好；4.建立了SP-D NM-CLIA定量检测方法；该法最低检测限为0.22ng/ml，线性范围1.0-1000.0ng/ml，Hook效应在50000ng/ml才出现；批内与批间变异系数均<6.0%；稀释回收率为91.17%～106.42%，添加回收率为91.00%～109.63%；与SP-A（10000ng/ml）、SP-B（10000ng/ml）和SP-C（10000ng/ml）交叉反应率低于0.1%；0.2mg/ml胆红素、5mg/ml血红蛋白、10mg/ml甘油三酯、1500U/ml的类风湿因子（RF）、抗凝剂，研究样本冻融3次和冻存120天对测值的无明显影响；整个检测所需时间约22min；5.与正常对照组（29.33±7.41ng/ml）比较，矽尘暴露组（48.67±17.79ng/ml）、0+组（95.23±24.83ng/ml）、I期矽肺组（160.28±39.05ng/ml）、间质性肺病(ILD)组（85.57±25.12ng/ml）、急性肺损伤(ALI)组（93.64±44.94ng/ml）、慢性阻塞性肺病(COPD)组血清SP-D含量均增高，差异均有统计学意义（P<0.01）；与矽尘暴露组比较， ILD组、ALI组、COPD组、0+组和I期矽肺组血清SP-D含量均增高，差异均有统计学意义（P<0.01）；矽肺I期组血清SP-D含量仍然高于0+组、ILD组、ALI组、COPD组，差异均有统计学意义（P<0.01）；血清SP-D含量与矽肺病情分级呈正相关性（rs=0.764,P<0.01）。COPD组血清SP-D含量高于ILD组、ALI组，差异均有统计学意义（P<0.01）；0+组、ILD组和ALI组三组间差异无统计学意义。结论：1.成功制备了SP-D多肽蛋白及其多抗；2.成功建立了豚鼠HGPRT基因缺陷型豚鼠瘤细胞系，并制备了豚鼠SP-D单克隆抗体；3.成功制备出了诊断用的纳米磁微粒；4.成功建立了性能稳定的血清SP-D定量检测NM-CLIA法；5.血清SP-D水平可作为肺相关疾病辅助诊断的生物标志物。